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有关制备生物样品的几个问题
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本人正负责一个药代动力学的课题,有几个问题想质询一下大家: 1,由于用到HPLC,我想问一下样品的制备跟检测限是否有关系,还是检测限只于色谱条件有关? 2,如何去确定样品的制备方法,比如说是溶剂的问题. 3,如何去了解相关的检验方法学,可以介绍一些书或课件吗? 本人是菜鸟,望各位不吝赐教. |
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4楼2012-07-24 09:58:29
xxaijwd
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【答案】应助回帖
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非主流大叔: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢指导,感激不尽 2012-07-22 09:56:29
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1、如果是做质量标准，往往用质量表示检测限，即进样浓度乘以进样的体积，这样就和你样品制备方法无关了。生物样品一般不做检测限，只考察最低定量限。生物样品的定量限一般用浓度表示，和样品的浓度有关，因此可以通过改变样品制备方法提高定量限。比如血浆（或其他生物样品）中浓度1微克/毫升，通过液液萃取后吹干复溶的方法，将1毫升的血浆浓缩为200微升，相当于把定量限降低了5倍。 2、样品制备方法一般通过查阅文献获得，通过比较不同文献的方法获得最适合你实验条件的方法。如果你做的是一类新药，就只能自己去摸体条件了。 3、方法学在指导原则里都说明白了，可以查阅中国药典第二部的附录，里面有药动的指导原则，还有专门针对生物利用度和生物等效性的指导原则。如果看不明白再问你身边做过的人吧。 |
2楼2012-07-22 09:39:04
白水6177
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【答案】应助回帖
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本人正负责一个药代动力学的课题,有几个问题想质询一下大家: 1,由于用到HPLC,我想问一下样品的制备跟检测限是否有关系,还是检测限只于色谱条件有关? 药代动力学的样品，是指的你采集于动物体内的样本，血浆样品、组织样品、尿样、胆汁、粪便等，不知道你做的是否只有血浆。血浆样品要经过前处理才能进入液相色谱仪，对于的不同的药物，紫外相应不一样，有的定量限可以定到50 ng甚至更低，但是大多数都在100 ng或者不到这么灵敏的地方。 检测限影响因素跟前处理有很大关系，处理血浆等生物样本里的杂质的方法，主要有液液萃取、沉淀蛋白、固相萃取等方法。检测限与液相色谱条件也有相关性，能选择较好的色谱柱和色谱条件使杂质与待测物质有效分离，且理论塔板数很高的话，利于积分和定量。 2,如何去确定样品的制备方法,比如说是溶剂的问题. 你所谓的样品制备指的是啥意思，是前处理么，血浆样品的前处理么，通常用的有乙腈或甲醇直接沉淀蛋白法、乙酸乙酯或其他有机溶剂的液液萃取法、合适条件的固相萃取柱的固相萃取法。 3,如何去了解相关的检验方法学,可以介绍一些书或课件吗? 我曾经在资源共享里发过一些课件等，可以查看。 |
3楼2012-07-23 10:32:57
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5楼2012-07-24 10:12:12