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重叠延伸PCR第一轮做出来了,但是第二轮P不出来
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飘零的叶子
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虫号: 1014719
[交流]
重叠延伸PCR第一轮做出来了,但是第二轮P不出来
我现在要做重叠延伸,第一轮PCR的两个片段都P出来了,核酸电泳的位置也是正确的,但是第二轮PCR总是P不出来,跑电泳时在100bp及250bp左右有很亮的条带,但是我的目的片段是在1400bp左右!哪位大侠知道这是什么原因啊?!
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重叠延伸PCR
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帮忙看下这两个引物有没有问题
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【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱,弥散
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1楼
2012-07-20 13:03:48
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smdsfy
铜虫
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虫号: 1285261
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看一下你得到的两个片段的亮度,调整它们之间的比例,另外,你还有看引物与使用的模板的摩尔比,调整一下,,你说有引物二聚体的话,引物应该没有问题,把片段A与B的比例调整一下,祝你成功!
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24楼
2012-07-23 15:34:44
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mitocam
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★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
100bp和250bp的是什么?
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3楼
2012-07-21 06:44:45
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引用回帖:
3楼
:
Originally posted by
mitocam
at 2012-07-21 06:44:45
100bp和250bp的是什么?
不知道啊,可能是引物二聚体吧,我们也很纠结那两条带是什么东西
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4楼
2012-07-21 09:16:36
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beer胖
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虫号: 1305517
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
第一轮两个片段的大小分别多少?
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5楼
2012-07-21 09:58:34
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