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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌菌悬液如何配
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hanreil

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌菌悬液如何配

我是从别的实验室要来的在试管里斜面划好的大肠杆菌，我现在做一大肠的菌悬液。该怎么弄？
我是先做的液体培养基，然后就直接用接种环把斜面上的细菌取了一小块放在液体培养基里了。我想问下 这样就可以直接用吗？还是得放在摇床上培养24H。
我自己是放在摇床上了245H，可是貌似没什么变化，培养基也没变浑浊。
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1楼 2012-07-16 17:04:00
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xuyisit

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hanreil: 金币+1 2012-07-17 21:52:03
一般大肠杆菌要用LB液体培养基，培养基需要灭菌。灭菌后需要冷却到室温再接种，在无菌条件下（一般是超净工作台）用接种环接种。接种后在30-37度根据需要培养一段时间。中间可以测定OD600来检测生长状态。如果是重组大肠杆菌，还需要根据其质粒中的抗性标记，在LB培养基中加入相应的抗生素。以上内容希望能对你有帮助。
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2楼2012-07-16 18:13:59
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hanreil: 金币+1, ★有帮助 2012-07-17 21:51:52
从别处拿来的？最好活化一下，平板活化最好，要了解清楚是否有抗性。活化后再接种液体培养基LB。
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3楼2012-07-16 18:40:54
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hanreil

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-16 18:40:54
从别处拿来的？最好活化一下，平板活化最好，要了解清楚是否有抗性。活化后再接种液体培养基LB。

怎么活化啊
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4楼2012-07-17 21:25:43
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hanreil

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyisit at 2012-07-16 18:13:59
一般大肠杆菌要用LB液体培养基，培养基需要灭菌。灭菌后需要冷却到室温再接种，在无菌条件下（一般是超净工作台）用接种环接种。接种后在30-37度根据需要培养一段时间。中间可以测定OD600来检测生长状态。如果是重组 ...

我用LB的斜面直接接种就可以吗？
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5楼2012-07-17 21:26:30
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hanreil at 2012-07-17 21:25:43
怎么活化啊...

就是拍固体平板上划线活化一下，保证菌的活力。
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6楼2012-07-17 21:33:55
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

配个LB固体培养基，灭菌后在培养皿中倒平板，挑取斜面上的菌在平板上划线（无菌操作），37℃培养12-24h，（若活化效果不好，菌长得不旺盛，可再活化一次）挑取菌种接种到液体LB培养基中，震荡（220rpm）培养12h就成菌悬液。
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7楼2012-07-17 21:57:19
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