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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物学到这个份上，让我无言~~~
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

[交流] 微生物学到这个份上，让我无言~~~ 已有29人参与

【你好！想向你请教一个问题，可否？】
-----------Go on, Pleas.


【你好，这是我发的一个求助帖，至今没有回复啊！真不好意思，没养成登陆小木虫的习惯，能否麻烦看一下我的问题是怎么一回[求助]金黄色葡萄球菌退化原因？？

各位虫友好，请大家帮忙分析一下我现在遇到的问题，着急啊，研三了影响实验进度啊！实验为抗菌活性的检测，检测样品是否抑制金黄色葡萄球菌,简称SA，菌株SA出现问题也不是第一次了，菌株是从学院的微生物实验室转接了两支斜面过来，起先活性还不错，（自己认为的）牛肉膏蛋白胨1天半可以长满平板的，但后来不知道什么原因，菌株不仅在平板上长得慢，而且密度也不如从前，最后 直接就不长了。自己分析原因，菌株退化，培养基，培养条件，觉得很有可能是菌株退化，又从那个实验室转接过来两支斜面，经过传代3次活化后，我就将SA配制成一定浓度的菌悬液，装于15%的甘油保存管中，保存于4摄氏度下。起先SA活性挺好的，1天就可以长满平板，持续了1个半月，但好景不长菌株又不行了，连续做了三次，三批平板的SA都不长,根本出不来检测结果，这次已经培养了40个h，只看见平板上零星长出来几个单菌落，指示菌问题不解决，实验就没法进行啊!
    请各位帮忙分析一下原因吧，如果是菌株退化，也就2个月时间，怎么这么容易退化呢？以前是直接斜面保存，后来通过跟其他实验室交流，改用了甘油低温保存方法。】

----------------是你的菌株保存方法出了问题！！！
用20-25%的甘油保存新鲜的细菌培养液，是在零下20至 一80℃，一年根本不会出问题。
谁告诉你在4℃保存的？！！！
你学微生物的，怎么这么基本的知识都不了解？


----------------配制500g/L的甘油母液，121摄氏度灭菌20-30min。
取OD 1-5 的细菌新鲜培养液 100 uL加入到 含有100 uL的 500g/L的甘油母液中。
用灭菌的1.5mL的EP管保存。 一次保存10-20管，每次拿出一支来涂平板培养新鲜的菌落。零下20度，最好零下80度保存。 两年基本没问题。
你。。。你。。。。让我说你什么呢？你都研三了，这样的事情还搞不定？！


【500g/L的甘油母液，甘油不是液体的吗？什么叫母液呢，请问可否告知你这个方法的参考来源呢？
恕我还想向你请教，真的想学习，OD值和细菌数目如何建立关系呢？如果OD值为1，那么细菌的数目为多少呢？因为看了文献的描述是细菌数目为多少cfu/mL。
  我们实验室就是这样做的，并没有太在意温度是4摄氏度会有如此大的影响，我知道低温是保存菌种的一个因素，但为什么要这么低的温度呢，4摄氏度为何就会不行呢，至少可以保证几个月吧？】

-----------我所说的是一个微生物实验室 最基本的知识。
一开始你这样问，我还以为你是诚心气我的。
所以我还怀疑你根本不是微生物专业的。

甘油母液即 Glycerol stock solution.
Glycerol stock solution (500g/L)：
40 ml 甘油用双蒸水定容成100 mL（也即40% v/v甘油溶液）。专门用来储存细菌或霉菌孢子的。。。因为届时按1:1体积加入，就成了最终甘油20%的含量。这个浓度可以使细菌在低温下储存很久而不会死掉。

OD和CFU/mL需要你用自己的细菌做稀释平板，计算得出。
我告诉你的数值不适合你的细菌。

用甘油保存菌株，什么温度最好，这是微生物专业的研一学生就应该了解的知识。
你再不懂，也应该知道有数据库或google可以查。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
1楼 2011-10-11 07:38:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wjf008

金虫 (正式写手)
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告诉你们一个秘密，生物教授老是骂学生一般分两种，一种是你的对照呢？另一种是你的平行呢？除此之外全bullshit。
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18楼2011-12-16 11:31:57
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普通回帖

虫儿7893

银虫 (小有名气)
★
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可能不是学微生物的吧。。。
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2楼2011-10-11 08:15:36
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hekouyanlei
3楼2011-10-11 08:37:17
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asznpb

木虫 (正式写手)
唉，悲催的娃平常都干嘛去了……
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显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-10-11 09:53:50
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龙儿无双

金虫 (著名写手)
★
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四度保存菌株，你太犀利了
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5楼2011-10-11 09:57:39
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怡然之昀

木虫 (正式写手)
★
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看来我不成气候的学生还是要比拟好多了，哈哈
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6楼2011-10-11 11:08:13
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
6楼: Originally posted by 怡然之昀 at 2011-10-11 11:08:13:
看来我不成气候的学生还是要比拟好多了，哈哈

看帖不认真。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2011-10-11 11:26:19
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sdlj_2009

银虫 (小有名气)
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zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-16 10:48:46
首先我们要感谢HarveyWang 提出了这个问题，谁都有阴沟里翻船的时候，也许HarveyWang 平时过于专注自己的实验，我们讲究做科研时眼观六路、耳听八方，不断的留意实验室里其他人在干什么，遇到什么问题，咋解决的，这样的积累，会很有帮助。另外要对其导师提出意见，他或她没有很好的关注HarveyWang的竞技状态。最后我们预祝HarveyWang进展顺利。
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8楼2011-10-13 21:37:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫儿7893 at 2011-10-11 08:15:36:
可能不是学微生物的吧。。。

觉得那个人心思完全不在学习上
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-10-13 22:50:12
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whl6673

金虫 (小有名气)
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zhang8826857(金币+1): 鼓励积极回帖交流^_^ 2011-10-16 10:48:56
嗨，除了保存里面还有个问题，里面有个更严重的结果你要注意，你的抑菌实验有对照吗。如果你的细菌根本接不活，在对照（无药物）平板上就不长的话，你就不该往下做实验，还谈什么实验结果。我现在怀疑你从保藏管中接出来时有没有活化几次。直接就做实验吗？实际上你在4度保存一个月的话，细菌也不至于全部死完。哎呀，实验多用心啊!小鬼
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10楼2011-10-14 11:02:00
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