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HarveyWang捐助贵宾 (知名作家)
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[交流]
微生物学到这个份上，让我无言~~~ 已有29人参与
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【你好！想向你请教一个问题，可否？】 -----------Go on, Pleas. 【你好，这是我发的一个求助帖，至今没有回复啊！真不好意思，没养成登陆小木虫的习惯，能否麻烦看一下我的问题是怎么一回[求助]金黄色葡萄球菌退化原因？？ 各位虫友好，请大家帮忙分析一下我现在遇到的问题，着急啊，研三了影响实验进度啊！实验为抗菌活性的检测，检测样品是否抑制金黄色葡萄球菌,简称SA，菌株SA出现问题也不是第一次了，菌株是从学院的微生物实验室转接了两支斜面过来，起先活性还不错，（自己认为的）牛肉膏蛋白胨1天半可以长满平板的，但后来不知道什么原因，菌株不仅在平板上长得慢，而且密度也不如从前，最后 直接就不长了。自己分析原因，菌株退化，培养基，培养条件，觉得很有可能是菌株退化，又从那个实验室转接过来两支斜面，经过传代3次活化后，我就将SA配制成一定浓度的菌悬液，装于15%的甘油保存管中，保存于4摄氏度下。起先SA活性挺好的，1天就可以长满平板，持续了1个半月，但好景不长菌株又不行了，连续做了三次，三批平板的SA都不长,根本出不来检测结果，这次已经培养了40个h，只看见平板上零星长出来几个单菌落，指示菌问题不解决，实验就没法进行啊! 请各位帮忙分析一下原因吧，如果是菌株退化，也就2个月时间，怎么这么容易退化呢？以前是直接斜面保存，后来通过跟其他实验室交流，改用了甘油低温保存方法。】 ----------------是你的菌株保存方法出了问题！！！ 用20-25%的甘油保存新鲜的细菌培养液，是在零下20至 一80℃，一年根本不会出问题。 谁告诉你在4℃保存的？！！！ 你学微生物的，怎么这么基本的知识都不了解？ ----------------配制500g/L的甘油母液，121摄氏度灭菌20-30min。 取OD 1-5 的细菌新鲜培养液 100 uL加入到 含有100 uL的 500g/L的甘油母液中。 用灭菌的1.5mL的EP管保存。 一次保存10-20管，每次拿出一支来涂平板培养新鲜的菌落。零下20度，最好零下80度保存。 两年基本没问题。 你。。。你。。。。让我说你什么呢？你都研三了，这样的事情还搞不定？！ 【500g/L的甘油母液，甘油不是液体的吗？什么叫母液呢，请问可否告知你这个方法的参考来源呢？ 恕我还想向你请教，真的想学习，OD值和细菌数目如何建立关系呢？如果OD值为1，那么细菌的数目为多少呢？因为看了文献的描述是细菌数目为多少cfu/mL。 我们实验室就是这样做的，并没有太在意温度是4摄氏度会有如此大的影响，我知道低温是保存菌种的一个因素，但为什么要这么低的温度呢，4摄氏度为何就会不行呢，至少可以保证几个月吧？】 -----------我所说的是一个微生物实验室 最基本的知识。 一开始你这样问，我还以为你是诚心气我的。 所以我还怀疑你根本不是微生物专业的。 甘油母液即 Glycerol stock solution. Glycerol stock solution (500g/L)： 40 ml 甘油用双蒸水定容成100 mL（也即40% v/v甘油溶液）。专门用来储存细菌或霉菌孢子的。。。因为届时按1:1体积加入，就成了最终甘油20%的含量。这个浓度可以使细菌在低温下储存很久而不会死掉。 OD和CFU/mL需要你用自己的细菌做稀释平板，计算得出。 我告诉你的数值不适合你的细菌。 用甘油保存菌株，什么温度最好，这是微生物专业的研一学生就应该了解的知识。 你再不懂，也应该知道有数据库或google可以查。 |
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