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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)

[求助] 单链DNA的PAGE具体操作

大家好 因为刚接触这个聚丙烯酰胺凝胶电泳,懂的甚少,最近也在查相关的知识,可是老板要求特别紧 ,让我自己尽快摸索出来,我的DNA就是35个碱基,用一些方法将他断链,所以想用PAGE验证一下是否形成了DNA片段,应该在用PAGE能看出来吧,求指点具体操作的步骤和注意事项 不胜感激。
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zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

15.2g 丙烯酰胺,0.8g 甲叉双丙烯酰胺 10ml 10*TBE,42g尿素 100ml双蒸水溶解定容至100ml  取6ml 这种溶液与 70ul10%过硫酸铵 (新配置的)4ul TEMED 33度下一天一夜也没凝固 求原因
7楼2012-07-17 11:23:51
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-07-16 13:55:46
xiong-y-x: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 16:55:46
核酸的PAGE与蛋白相似,仅是把蛋白PAGE的缓冲液换成核酸缓冲液,注重配胶时的浓度,仅一层胶就行。染色时把胶放置染色皿中,加1X缓冲液,滴加EB振荡染色10-20分,放置在紫外检测以上检测即可。很简单的,你可以试试,祝你成功。
跑核酸的PAGE,不用加SDS的。用TBE的电泳缓冲液,15×17cm的12%的PAGE胶足够分离,电泳到二甲苯完全迁出,溴酚蓝距底边2~3cm停止,1ug/ml
EB 染胶2~5min,紫外线看就ok了,试剂配方参见分子克隆或是Takara目录后的附录。
coasttocoast。
2楼2012-07-16 12:28:13
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zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)

请问胶浓度是如何选择的?
3楼2012-07-16 13:19:09
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个根据dna分子的大小来定,一般来说你的35个bp,应该选择最高的胶浓度
coasttocoast。
4楼2012-07-16 14:30:48
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