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xiong-y-x

金虫 (正式写手)

[求助] 单链DNA的PAGE具体操作

大家好 因为刚接触这个聚丙烯酰胺凝胶电泳，懂的甚少，最近也在查相关的知识，可是老板要求特别紧 ，让我自己尽快摸索出来，我的DNA就是35个碱基，用一些方法将他断链，所以想用PAGE验证一下是否形成了DNA片段，应该在用PAGE能看出来吧，求指点具体操作的步骤和注意事项 不胜感激。
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1楼2012-07-16 11:12:42
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-07-16 13:55:46
xiong-y-x: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 16:55:46
核酸的PAGE与蛋白相似，仅是把蛋白PAGE的缓冲液换成核酸缓冲液，注重配胶时的浓度，仅一层胶就行。染色时把胶放置染色皿中，加1X缓冲液，滴加EB振荡染色10-20分，放置在紫外检测以上检测即可。很简单的，你可以试试，祝你成功。
跑核酸的PAGE，不用加SDS的。用TBE的电泳缓冲液，15×17cm的12％的PAGE胶足够分离，电泳到二甲苯完全迁出，溴酚蓝距底边2～3cm停止，1ug/ml
EB 染胶2～5min，紫外线看就ok了，试剂配方参见分子克隆或是Takara目录后的附录。
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coasttocoast。
2楼2012-07-16 12:28:13
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zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)
请问胶浓度是如何选择的？
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3楼2012-07-16 13:19:09
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个根据dna分子的大小来定，一般来说你的35个bp，应该选择最高的胶浓度
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coasttocoast。
4楼2012-07-16 14:30:48
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xiong-y-x

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-16 12:28:13
核酸的PAGE与蛋白相似，仅是把蛋白PAGE的缓冲液换成核酸缓冲液，注重配胶时的浓度，仅一层胶就行。染色时把胶放置染色皿中，加1X缓冲液，滴加EB振荡染色10-20分，放置在紫外检测以上检测即可。很简单的，你可以试试 ...

谢谢啦 就是还没开始做 现在一直在查，我看见有说用EB不能染单链DNA，说用银染比较好，可是我们师姐让别人做的银染的都做的不好，其实我懂的真的很少，谢谢了
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5楼2012-07-16 17:01:28
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zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PAGE凝胶电泳跑核酸 不是有20%的胶浓度吗 是碱基数越少 选择的胶浓度越大吗 我有一条链是26bp 一条是52 还有是这两条杂交的78 选择的胶浓度大概多大？ 可以用变性尿素凝胶电泳分开不？ 你有没有具体的实验操作步骤及试剂的配置方法 ，是新手 请多多指导下，我现在配置的胶都不凝固 配方是15.2g 丙烯酰胺，0.8g 甲叉双丙烯酰胺 10ml 10*TBE，42g尿素 100ml双蒸水溶解定容  求原因
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6楼2012-07-17 11:04:12
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zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

15.2g 丙烯酰胺，0.8g 甲叉双丙烯酰胺 10ml 10*TBE，42g尿素 100ml双蒸水溶解定容至100ml  取6ml 这种溶液与 70ul10%过硫酸铵 （新配置的）4ul TEMED 33度下一天一夜也没凝固 求原因
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7楼2012-07-17 11:23:51
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-16 06:28:13
核酸的PAGE与蛋白相似，仅是把蛋白PAGE的缓冲液换成核酸缓冲液，注重配胶时的浓度，仅一层胶就行。染色时把胶放置染色皿中，加1X缓冲液，滴加EB振荡染色10-20分，放置在紫外检测以上检测即可。很简单的，你可以试试 ...

请问配PAGE胶的时候跟跑蛋白时候的胶是同样的配法吗，还是用配琼脂糖凝胶的模板去做PAGE呢？
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身体健康，工作顺利
8楼2014-10-24 16:19:04
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