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吉林农大

木虫 (小有名气)

[求助] 酵母原生质球转化转不进去是怎么回事呢?

我是严格按照invitrogen的原生质球转化方法来做的,可就是转不出来,大家有什么经验之谈,能交流一下吗,谢谢!
pPIC3.5k载体,SalI单酶切线性化,SMD1168菌株.用的是Invitrogen,一万元的原生质球转化试剂盒.阴性对照,在RDH平板上能长很多,说明原生质球酵母真菌还活着,可就是转化后的原生质球在RD平板上不长.我是将45度融化的RD顶层琼脂与转化后处理过的体系相混合,再直接倒于RD平板上,待上层RD琼脂全凝后,置于30度下培养,N天后依然不长,做了不下3次了,依然不长.求教,还有什么值得注意的,谢谢大家!
多给点经验,救救我吧!
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我靠
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