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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于RNA抽提的问题
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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA抽提的问题

Trizol法抽提细胞总RNA时加入氯仿后能剧烈震荡吗?我按照操作说明剧烈震荡的，可是有的时候跑电泳会有杂带，有的时候又没有。不知道是不是这个原因造成的
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1楼 2012-07-05 15:02:28
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Zhanghui0429: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2012-07-05 16:47:52
Trizol法提RNA，加入氯仿可以剧烈震荡，以保证两相混合均匀。氯仿主要作用是变性沉淀蛋白，和抽提水相中杂质。你的杂带与氯仿振摇无关，可以考虑多用氯仿抽提一遍，或在初始提高一些Trizol试剂用量，不过最好贴一张电泳图以供分析。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-07-05 16:31:47
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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-05 16:31:47
Trizol法提RNA，加入氯仿可以剧烈震荡，以保证两相混合均匀。氯仿主要作用是变性沉淀蛋白，和抽提水相中杂质。你的杂带与氯仿振摇无关，可以考虑多用氯仿抽提一遍，或在初始提高一些Trizol试剂用量，不过最好贴一张 ...

谢谢，氯仿重新抽提一遍是我离心吸上清后再加一些氯仿吗？可是那时我要的液相怎么和杂质区分呢？
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3楼2012-07-05 16:47:38
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Zhanghui0429 at 2012-07-05 16:47:38
谢谢，氯仿重新抽提一遍是我离心吸上清后再加一些氯仿吗？可是那时我要的液相怎么和杂质区分呢？...

吸走水相，加氯仿，振摇离心，再吸取水相，蛋白会沉淀在两相交界，一些杂质会留在有机相里
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-07-05 17:49:38
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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-05 17:49:38
吸走水相，加氯仿，振摇离心，再吸取水相，蛋白会沉淀在两相交界，一些杂质会留在有机相里...

哦，真是谢谢了！
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5楼2012-07-05 19:31:39
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