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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA抽提的问题

Trizol法抽提细胞总RNA时加入氯仿后能剧烈震荡吗?我按照操作说明剧烈震荡的,可是有的时候跑电泳会有杂带,有的时候又没有。不知道是不是这个原因造成的
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starseacow

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【答案】应助回帖

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Zhanghui0429: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢! 2012-07-05 16:47:52
Trizol法提RNA,加入氯仿可以剧烈震荡,以保证两相混合均匀。氯仿主要作用是变性沉淀蛋白,和抽提水相中杂质。你的杂带与氯仿振摇无关,可以考虑多用氯仿抽提一遍,或在初始提高一些Trizol试剂用量,不过最好贴一张电泳图以供分析。
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2楼2012-07-05 16:31:47
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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-05 16:31:47
Trizol法提RNA,加入氯仿可以剧烈震荡,以保证两相混合均匀。氯仿主要作用是变性沉淀蛋白,和抽提水相中杂质。你的杂带与氯仿振摇无关,可以考虑多用氯仿抽提一遍,或在初始提高一些Trizol试剂用量,不过最好贴一张 ...

谢谢,氯仿重新抽提一遍是我离心吸上清后再加一些氯仿吗?可是那时我要的液相怎么和杂质区分呢?
3楼2012-07-05 16:47:38
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Zhanghui0429 at 2012-07-05 16:47:38
谢谢,氯仿重新抽提一遍是我离心吸上清后再加一些氯仿吗?可是那时我要的液相怎么和杂质区分呢?...

吸走水相,加氯仿,振摇离心,再吸取水相,蛋白会沉淀在两相交界,一些杂质会留在有机相里
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4楼2012-07-05 17:49:38
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Zhanghui0429

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-05 17:49:38
吸走水相,加氯仿,振摇离心,再吸取水相,蛋白会沉淀在两相交界,一些杂质会留在有机相里...

哦,真是谢谢了!
5楼2012-07-05 19:31:39
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