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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC含量测定遇到的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zuihuaying

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC含量测定遇到的问题

最近在做高液，在进对照品做标准曲线时刚开进样10uL，峰形很好且对称，当增大进样量到20uL时峰形变得很差，有点拖尾，再增加进样量到25uL时，峰形还是和20uL差不多，但是峰面积没增加多少，我的C对照品=0.540mg/ml,各进样量与峰面积如下所示：
进样量ul        4        6        8        10        15        20        25        28
峰面积        729012        1099891        1466323        1826574        2720422        3103343        3270460        3310054
我的A供1=1335431，A供2=3851411(进样量10uL)，我想把供试品2包含到标准曲线的线性范围内，可是再增加进样量峰面积也没变化多少，是我的对照品浓度配稀了吗，还是需要把供试品2稀释，使A供试品2落在标准曲线以内，计算时从标准曲线上选一个点利用公式C对照品/C供试品=A对照品/A供试品来计算吗，标准曲线上所选取的点有什么要求，进样量和供试品的一样吗？在此谢谢大家啦
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1楼 2012-07-05 10:55:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zuihuaying: 金币+1 2012-07-05 11:31:45
进样量标准规定多少就不能再修改。

做线性是改变浓度，而不是改变进样量。
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红颜远，相思苦，几番意，难相付。十年情思百年渡，不斩相思不忍顾！
2楼2012-07-05 11:15:54
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junhancao

金虫 (小有名气)
1.做线性一般不是改变进样量，1-2ul的变化仪器误差是会很大的,最好采用对半稀释等办法，配成一系列浓度溶液等量进样
2.如果是定量环的话，很可能你后续设计的进样量过载了
3.即使进样量不过载，对于检测器而言响应也有至大值，超过的时候，响应就    不会按线性成倍增大了
4.解决A2进线性范围的问题很简单，直接把A2稀释吧，不然峰面积过大 积分也是不准确的
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17楼2012-07-07 11:04:02
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普通回帖

zwp920

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
过载了，进样量有最大限度。
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3楼2012-07-05 11:18:53
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
该方法做标准曲线不合适，而是稀释至一定浓度做曲线。该方法可能会造成样品积分不一致，线性不准确。
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4楼2012-07-05 11:28:18
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zuihuaying

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zwp920 at 2012-07-05 11:18:53
过载了，进样量有最大限度。

我用的是岛津自动进样，最大进样量不会这么小吧，我师兄做的进30uL对照品峰形也很好，不知道是我的进样量过载了吗？那需要怎么调整，麻烦给指导一下，谢谢啦
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5楼2012-07-05 11:31:27
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plc88

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zuihuaying: 金币+1 2012-07-05 11:39:03
超载峰肯定峰形不好，改变供试品的浓度，线性范围也需要摸索。。。
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In..nature,there..are..no..rewards..and..punishents,there..are..all..consequences.
6楼2012-07-05 11:31:38
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zuihuaying

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by plc88 at 2012-07-05 11:31:38
超载峰肯定峰形不好，改变供试品的浓度，线性范围也需要摸索。。。

谢谢哈，那计算含量时是从标准曲线上选一个点，这个点的峰面积和进样量要和供试品一致吗
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7楼2012-07-05 11:34:15
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menghandna

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-07-05 13:22:29
zuihuaying: 金币+1 2012-07-05 21:02:43
从数据上来看，应该是过载导致的。建议将供试品2稀释后再进样。
另外，标准曲线采用改变进样量的方法不严谨，建议采用进样体积一致，同时将对照品稀释成不同浓度系列后进样的方法。
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8楼2012-07-05 13:07:19
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firstcat

银虫 (小有名气)
定量环应该是20ul的，超过20其实也是进的20ul
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9楼2012-07-05 13:36:04
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要用改变进样量来做线性，那样变成在考察你的仪器性能了。看你的情况应该是过载了，降低浓度做下
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10楼2012-07-05 13:37:50
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