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zuihuaying

银虫 (小有名气)

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[求助] HPLC含量测定遇到的问题

最近在做高液，在进对照品做标准曲线时刚开进样10uL，峰形很好且对称，当增大进样量到20uL时峰形变得很差，有点拖尾，再增加进样量到25uL时，峰形还是和20uL差不多，但是峰面积没增加多少，我的C对照品=0.540mg/ml,各进样量与峰面积如下所示：
进样量ul 4 6 8 10 15 20 25 28
峰面积 729012 1099891 1466323 1826574 2720422 3103343 3270460 3310054
我的A供1=1335431，A供2=3851411(进样量10uL)，我想把供试品2包含到标准曲线的线性范围内，可是再增加进样量峰面积也没变化多少，是我的对照品浓度配稀了吗，还是需要把供试品2稀释，使A供试品2落在标准曲线以内，计算时从标准曲线上选一个点利用公式C对照品/C供试品=A对照品/A供试品来计算吗，标准曲线上所选取的点有什么要求，进样量和供试品的一样吗？在此谢谢大家啦

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1楼 2012-07-05 10:55:38

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junhancao

金虫 (小有名气)

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专业: 药物分析

1.做线性一般不是改变进样量，1-2ul的变化仪器误差是会很大的,最好采用对半稀释等办法，配成一系列浓度溶液等量进样
2.如果是定量环的话，很可能你后续设计的进样量过载了
3.即使进样量不过载，对于检测器而言响应也有至大值，超过的时候，响应就不会按线性成倍增大了
4.解决A2进线性范围的问题很简单，直接把A2稀释吧，不然峰面积过大积分也是不准确的