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zuihuaying

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC含量测定遇到的问题

最近在做高液,在进对照品做标准曲线时刚开进样10uL,峰形很好且对称,当增大进样量到20uL时峰形变得很差,有点拖尾,再增加进样量到25uL时,峰形还是和20uL差不多,但是峰面积没增加多少,我的C对照品=0.540mg/ml,各进样量与峰面积如下所示:
进样量ul        4        6        8        10        15        20        25        28
峰面积        729012        1099891        1466323        1826574        2720422        3103343        3270460        3310054
我的A供1=1335431,A供2=3851411(进样量10uL),我想把供试品2包含到标准曲线的线性范围内,可是再增加进样量峰面积也没变化多少,是我的对照品浓度配稀了吗,还是需要把供试品2稀释,使A供试品2落在标准曲线以内,计算时从标准曲线上选一个点利用公式C对照品/C供试品=A对照品/A供试品来计算吗,标准曲线上所选取的点有什么要求,进样量和供试品的一样吗?在此谢谢大家啦
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zuihuaying

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by plc88 at 2012-07-05 11:31:38
超载峰肯定峰形不好,改变供试品的浓度,线性范围也需要摸索。。。

谢谢哈,那计算含量时是从标准曲线上选一个点,这个点的峰面积和进样量要和供试品一致吗
7楼2012-07-05 11:34:15
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖


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zuihuaying: 金币+1 2012-07-05 11:31:45
进样量标准规定多少就不能再修改。

做线性是改变浓度,而不是改变进样量。
红颜远,相思苦,几番意,难相付。十年情思百年渡,不斩相思不忍顾!
2楼2012-07-05 11:15:54
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zwp920

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过载了,进样量有最大限度。
3楼2012-07-05 11:18:53
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
该方法做标准曲线不合适,而是稀释至一定浓度做曲线。该方法可能会造成样品积分不一致,线性不准确。
4楼2012-07-05 11:28:18
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