| 查看: 2208 | 回复: 8 | |||
[交流]
PET-32a双酶切无法回收 已有8人参与
|
|
用SalI和NotI双酶切和t载体连接的目的片段及pET-32a空载体，发现目的片段能一次性顺利回收回来并且鉴定完全正确，但空载体酶切后不是没有条带（提的质粒已经鉴定，浓度和质量绝对么有问题），要不有带但经回收后鉴定时就消失了！！！！做了有四次了，只有一次有条带但鉴定没有了!剩下的都是回收时没有条带！！！！ 个人分析： 1,酶没有问题，因为目的条带顺利回收！ 2,胶，缓冲液及试剂盒没有问题，因为目的条带顺利回收！ 3,没有降解问题，因为有没有酶切的载体做对照！且marker跑的很好！ 4,提的质粒没有问题吧？！鉴定过了，三条带非常完整，且亮度足够！ 5,酶切是在37度下进行，试过过夜，5小时，4小时，3小时！体系也试过40ul20ul的等等都优化了，结果都一样！ 这个实验以前做过，同样的实验，只不过最近在重复做，但就遇到这种情况了，遇到鬼了！ 希望各位能帮忙分析一下！不甚感激啊！！！！谢谢！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 双酶切
已经有12人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 求教关于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用来回收双酶切过的pcr产物
已经有3人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
- 【求助/交流】DNA酶切回收跑胶怎么有小条带啊？[
已经有8人回复
- 【分享】关于载体双酶切的一些经验
已经有19人回复
- 求双酶切，分步酶切的具体操作步骤
已经有7人回复
syn1985
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2765.5
- 散金: 60
- 红花: 3
- 帖子: 578
- 在线: 273.2小时
- 虫号: 463029
- 注册: 2007-11-19
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
2楼2012-06-30 15:20:15
yuzhiming
捐助贵宾 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 18071.4
- 散金: 4225
- 红花: 10
- 帖子: 7776
- 在线: 1218.1小时
- 虫号: 48471
- 注册: 2004-06-19
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2012-07-01 11:32:03
4楼2012-07-01 12:22:17
boyx
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1022.6
- 红花: 1
- 帖子: 375
- 在线: 115.1小时
- 虫号: 1569559
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 动物遗传学
5楼2012-07-01 12:42:11
Marado
金虫 (正式写手)
Dreamer
- MolEPI: 2
- 应助: 81 (初中生)
- 金币: 1458.8
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 430
- 在线: 196.7小时
- 虫号: 1512351
- 注册: 2011-11-27
- 专业: 生物化学
6楼2012-07-02 15:13:09
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16390.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3648
- 在线: 288.2小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
7楼2012-07-02 19:24:46
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
楼主问题解决了吗？我也遇到了同样的问题，酶切后跑胶条带则挺亮的。但是一回收测浓度就特别低，纯度也不好，同时胶回收别的就可以，只有pET32a不行 发自小木虫Android客户端 |
8楼2020-10-02 11:30:31
junjieshao
禁虫 (小有名气)
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2020-10-03 00:43:47
10