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PET-32a双酶切无法回收已有8人参与
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用SalI和NotI双酶切和t载体连接的目的片段及pET-32a空载体，发现目的片段能一次性顺利回收回来并且鉴定完全正确，但空载体酶切后不是没有条带（提的质粒已经鉴定，浓度和质量绝对么有问题），要不有带但经回收后鉴定时就消失了！！！！做了有四次了，只有一次有条带但鉴定没有了!剩下的都是回收时没有条带！！！！ 个人分析： 1,酶没有问题，因为目的条带顺利回收！ 2,胶，缓冲液及试剂盒没有问题，因为目的条带顺利回收！ 3,没有降解问题，因为有没有酶切的载体做对照！且marker跑的很好！ 4,提的质粒没有问题吧？！鉴定过了，三条带非常完整，且亮度足够！ 5,酶切是在37度下进行，试过过夜，5小时，4小时，3小时！体系也试过40ul20ul的等等都优化了，结果都一样！ 这个实验以前做过，同样的实验，只不过最近在重复做，但就遇到这种情况了，遇到鬼了！ 希望各位能帮忙分析一下！不甚感激啊！！！！谢谢！！！！！ |
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7楼2012-07-02 19:24:46