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majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 硫酸铵沉淀后我的目的蛋白含量没有明显增多,怎么回事啊???????????

我的目的蛋白用30%和70%硫酸铵分级沉淀,沉淀后蛋白含量没有明显增多,SDS-PAGE后目的条带并没有那种很粗很粗的条带,而是很细,求助各位大侠怎么回事啊?????谢谢!不胜感激!
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白和硫酸铵反应成沉淀了,所以理论上上清中的目的蛋白是比较少的,你进行SDS-PAGE的时候可以将上清和沉淀都按等量上样(对照),这样你就可以比较上清和沉淀哪个所含的目的蛋白多,当然也可以比较不同浓度硫酸铵条件下,沉淀中所含目的蛋白的多少。望对楼主有帮助。
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-06-28 10:47:49
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guoxaing

铜虫 (初入文坛)

首先,采用硫铵有稀释的作用
提取大师
3楼2012-06-28 14:54:15
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majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guoxaing at 2012-06-28 14:54:15
首先,采用硫铵有稀释的作用

可是我看文献硫酸铵沉淀后目的条带都是很粗啊~555555~我就做不出那种效果。
.。。。。。。。。。。。
4楼2012-06-28 15:28:04
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lei5198

金虫 (初入文坛)

lei5198

【答案】应助回帖

试试硫酸铵50%的浓度沉淀,估计是不是蛋白没有沉淀下来,或者污染分解了,不知道正不正确,只是猜想.
凡事都怕认真
5楼2012-06-30 09:41:52
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