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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关引物设计时加酶切位点
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cecilyn

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关引物设计时加酶切位点

请问在设计引物加酶切位点时还要加保护碱基,这个保护碱基是位点两边都加,还是只加5'端的呢..

如果酶切位点两边都加保护碱基了..有什么影响没..

请各位大侠指教阿..
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1楼 2012-06-23 20:04:14
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xiaonong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nemo88 at 2012-06-24 17:02:47
如果一定要加，就只在5端加就可以
酶切位点3端没有必要加，如果你现在已经加了的话要注意目的基因是否会移码，只要不移码应该就可以

请问怎么知道目的基因有没有移码？
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看不到未来，所以恐惧
9楼2017-12-28 14:13:55
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小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
保护碱基现在没有必要加了，假如加的话是在5端
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飞的更高
2楼2012-06-23 20:47:25
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chan_6217911

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:43:39
如果PCR产物连接T载体再酶切，就没有必要加保护碱基；如果是PCR产物回收后直接酶切，还是加上保护碱基的好（因为保护碱基对内切酶切割DNA有很大影响）
保护碱基一般都加在5‘端，如果两端都加的话，将导致目的基因上引入若干个碱基序列，如果是基因表达实验的话，有可能导致下游基因移码突变。
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3楼2012-06-23 23:30:46
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你如果在引物3’端都加酶切位点的话，PCR是做不出来的，因为最后几个碱基和模板不匹配，DNA聚合酶在这里是无法走下去的。
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4楼2012-06-24 09:37:58
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