应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关引物设计时加酶切位点
51/1返回列表
查看: 3459  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cecilyn

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关引物设计时加酶切位点

请问在设计引物加酶切位点时还要加保护碱基,这个保护碱基是位点两边都加,还是只加5'端的呢..

如果酶切位点两边都加保护碱基了..有什么影响没..

请各位大侠指教阿..
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-23 20:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你如果在引物3’端都加酶切位点的话，PCR是做不出来的，因为最后几个碱基和模板不匹配，DNA聚合酶在这里是无法走下去的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-06-24 09:37:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
保护碱基现在没有必要加了，假如加的话是在5端
赞一下 回复此楼
飞的更高
2楼2012-06-23 20:47:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chan_6217911

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:43:39
如果PCR产物连接T载体再酶切，就没有必要加保护碱基；如果是PCR产物回收后直接酶切，还是加上保护碱基的好（因为保护碱基对内切酶切割DNA有很大影响）
保护碱基一般都加在5‘端，如果两端都加的话，将导致目的基因上引入若干个碱基序列，如果是基因表达实验的话，有可能导致下游基因移码突变。
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-23 23:30:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:43:58
cecilyn: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-05 22:17:17
本帖内容被屏蔽
5楼2012-06-24 17:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭