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cecilyn

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关引物设计时加酶切位点

请问在设计引物加酶切位点时还要加保护碱基,这个保护碱基是位点两边都加,还是只加5'端的呢..

如果酶切位点两边都加保护碱基了..有什么影响没..

请各位大侠指教阿..
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
需要加的,不同的酶切位点保护性碱基不同,可以网上查查。
7楼2012-06-25 18:15:19
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小白虾

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
保护碱基现在没有必要加了,假如加的话是在5端
飞的更高
2楼2012-06-23 20:47:25
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chan_6217911

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-25 13:43:39
如果PCR产物连接T载体再酶切,就没有必要加保护碱基;如果是PCR产物回收后直接酶切,还是加上保护碱基的好(因为保护碱基对内切酶切割DNA有很大影响)
保护碱基一般都加在5‘端,如果两端都加的话,将导致目的基因上引入若干个碱基序列,如果是基因表达实验的话,有可能导致下游基因移码突变。
3楼2012-06-23 23:30:46
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你如果在引物3’端都加酶切位点的话,PCR是做不出来的,因为最后几个碱基和模板不匹配,DNA聚合酶在这里是无法走下去的。
4楼2012-06-24 09:37:58
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