24小时热门版块排行榜    

查看: 2203  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

构质粒ING

新虫 (初入文坛)

[求助] 【SOS】PUC18 SphI和PstI 酶切

各位大侠,我现在要用PUC18构建质粒,用到这个载体上的SphI和PstI这两个酶切位点,我需要将目的基因通过这两个位点插入PUC18。通过分析,这两个酶切位点是挨着的,那么
1.如果我使用TAKARA共H buffer同时双酶切的话,可以把这两个酶切位点切开么?
2.我查了一下PstI酶切位点的保护碱基,如果酶切效率大于90的话,是有这两种保护碱基的添加方式:AACTGCAGAACCAATGCATTGG
                        AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA   
我怎么觉得这么诡异呢……  还请大家指点迷津!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔李粉

木虫 (正式写手)

takara没有SPH1酶   NEB有
7楼2012-06-22 16:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

构质粒ING

新虫 (初入文坛)

另外,有没有战友用TAKARA 的SalI和BamHI共BUFFER酶切过?
2楼2012-06-20 15:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
构质粒ING: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-06-21 10:47:56
1,紧挨着的酶切位点最好分布酶切,不然效率比较低。
2,一般酶切位点的保护碱基只需要额外多出三个碱基就可以了。
3楼2012-06-20 20:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
构质粒ING: 金币+1 2012-06-21 10:49:52
1.选酶切位点时,尽量离远一点。这样酶切的干净,自连少。像你这种情况就按楼上说的分布酶切。
2.PstI酶切效率还行,你写的都行,主要看下你上下游引物的退火温度,差值尽量控制在3度以内。
4楼2012-06-20 20:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +5 CX 330 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:32 by 杨杨杨紫
[考研] 考研调剂 +3 来好运来来来 2026-03-21 3/150 2026-03-22 11:24 by 杨杨杨紫
[考研] 303求调剂 +4 安忆灵 2026-03-22 5/250 2026-03-22 11:09 by 杨杨杨紫
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 生物学调剂 +4 Surekei 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:18 by ilovexiaobin
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
请填处理意见