应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【SOS】PUC18 SphI和PstI 酶切
51/1返回列表
查看: 2058  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

构质粒ING

新虫 (初入文坛)

[求助] 【SOS】PUC18 SphI和PstI 酶切

各位大侠，我现在要用PUC18构建质粒，用到这个载体上的SphI和PstI这两个酶切位点，我需要将目的基因通过这两个位点插入PUC18。通过分析，这两个酶切位点是挨着的，那么
1.如果我使用TAKARA共H buffer同时双酶切的话，可以把这两个酶切位点切开么？
2.我查了一下PstI酶切位点的保护碱基，如果酶切效率大于90的话，是有这两种保护碱基的添加方式：AACTGCAGAACCAATGCATTGG
                        AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA   
我怎么觉得这么诡异呢……  还请大家指点迷津！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-06-20 15:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

构质粒ING

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jqq1985 at 2012-06-20 20:41:00
1，紧挨着的酶切位点最好分布酶切，不然效率比较低。
2，一般酶切位点的保护碱基只需要额外多出三个碱基就可以了。

其他酶切位点的保护碱基都比较正常，就是这个PstI的保护碱基很诡异，我查了一下它的保护碱基，如果加三个的话，酶切效率特别低……
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-21 10:49:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

构质粒ING

新虫 (初入文坛)
另外，有没有战友用TAKARA 的SalI和BamHI共BUFFER酶切过？
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-20 15:50:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
构质粒ING: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-06-21 10:47:56
1，紧挨着的酶切位点最好分布酶切，不然效率比较低。
2，一般酶切位点的保护碱基只需要额外多出三个碱基就可以了。
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-20 20:41:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
构质粒ING: 金币+1 2012-06-21 10:49:52
1.选酶切位点时，尽量离远一点。这样酶切的干净，自连少。像你这种情况就按楼上说的分布酶切。
2.PstI酶切效率还行，你写的都行，主要看下你上下游引物的退火温度，差值尽量控制在3度以内。
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-20 20:56:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭