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liushan09

铜虫 (小有名气)

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专业: 生物技术药物

[求助] ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？

ELISA检测血清样品中蛋白含量。常规过程。
同一样品不同稀释倍数得到结果差别较大，并且是随着稀释倍数越大越大，根据标准曲线计算出的结果就越大，这是什么个情况？
PS：之前也有碰到过，以为是稀释时混合不够均匀的问题，后一段时间没做，这次的结果又出现在这个问题。之前做倍比稀释，这次是3倍稀释。
Sample ID Loc Dilution Blank Data Calc Conc
SMP02 A4 20 0.386 3378.65
B4 60 0.32 7141.63
C4 180 0.194 10934.7
D4 540 0.108 17991.7
[Ave] 0.252 9861.67
百思不得其解啊。。谁能给些意见建议，先在此谢过啦~

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1楼 2012-06-18 14:55:38

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liushan09

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by lliu at 2012-06-21 11:36:58
抗原抗体结合存在有最佳比例关系。
如果抗原（或抗体）初始浓度太高，抗原与抗体之间的浓度差别过大，就会出现如此现象。随着进一步的稀释，便会出现关系曲线。当浓度低于一定范围，反应关系消失。

所以，Elisa ...

ELISA体系是之前实验人员建立的，标准曲线采用软件进行四参数拟合，举例如图。
又想了想出现上述情况可能的原因：
1、样品稀释
2、从低浓度到高浓度加样，不换枪头
3、标准曲线的形状。落在高吸光值区间，稍一点偏差对结果影响就很大。因此在稀释倍数准确的情况下，落在标准曲线变化急剧区域数据更准确。即吸光值小的部分结果准确。
1、2现在基本可以排除。这两次进行了自认为非常充分的稀释过程。之前加样也是低浓度到高浓度不换枪头。所以，3的可能性比较大。