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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？
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liushan09

铜虫 (小有名气)

[求助] ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？

ELISA检测血清样品中蛋白含量。常规过程。
同一样品不同稀释倍数得到结果差别较大，并且是随着稀释倍数越大越大，根据标准曲线计算出的结果就越大，这是什么个情况？
PS：之前也有碰到过，以为是稀释时混合不够均匀的问题，后一段时间没做，这次的结果又出现在这个问题。之前做倍比稀释，这次是3倍稀释。
Sample ID Loc        Dilution        Blank Data Calc Conc
SMP02        A4        20        0.386        3378.65
        B4        60        0.32        7141.63
        C4        180        0.194        10934.7
        D4        540        0.108        17991.7
        [Ave]                0.252        9861.67
百思不得其解啊。。谁能给些意见建议，先在此谢过啦~
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1楼 2012-06-18 14:55:38
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

标准曲线是自己做的吗？你测的血清样品中的蛋白是什么物质啊？是血清中本来就有的东西还是输入动物体内的啊？楼主没有说明白啊。
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3楼2012-06-21 15:38:43
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-21 23:37:04
目的蛋白是类似于人抗体的蛋白，小鼠血清中本没有。小鼠给药后，采血取血清进行ELISA检测。
标准曲线是用KC Junior软件进行四参数拟合的结果。4楼附上了标准曲线的例子。
29/c8/851166_1340292997_248.jpg
...

1.你的稀释倍数是根据理论血药浓度推算的吗？
2.这个情况的可能原因是你给小鼠注射药后，药物在体内产生了抗药性抗体，在这种情况下是稀释倍数越大，值越高。
3.还有一种情况是你用的这个方法有HOOK效应，在这种情况下也是稀释倍数越大，值越高，但是当稀释倍数够大，这种效应就不会影响到结果。
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7楼2012-06-22 20:29:16
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-24 15:00:50
1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0. ...

1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。
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12楼2012-06-26 13:39:05
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-24 14:01:25
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ...

1.小鼠的理论血药浓度为：5mg/kg:58.5ml/kg再乘以F（生物利用度），58.5ml/kg是小鼠的血容量，得到0.08547×Fmg/ml就是小鼠体内的血药浓度。
2.你的实验一共就采集到48h，应该没有抗药性抗体产生。
3.HOOK效应你可以验证一下，方法：做10×ULOQ，100×ULOQ，1000×ULOQ,测定这几个浓度的OD值，如果随着浓度增大而OD降低就表明有HOOK效应。（ULOQ就是你的最高定量限）
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13楼2012-06-26 13:45:32
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