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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
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songtuo1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活

请问各位大仙，有谁知道如何用DNS法测α-淀粉酶酶活吗？小弟最近正愁这事呢，有人知道的话，教小弟具体步骤吧，急
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1楼 2012-06-07 16:19:05
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misure9905

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-06-10 17:59:44
我觉得我用的方法步骤少，酶降解反应所需体积小，便于大规模操作。

我用的DNS试剂配方如下（1L）：
四水合酒石酸钾钠200g，氢氧化钠20g，无水亚硫酸钠0.5g，结晶酚2g， DNS 10g，室温避光静置7天后可用。

我 ...

请问您的0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠缓冲液，pH是多少
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10楼2015-08-18 17:07:56
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 23:06:34
DNS法其实是测定还原糖含量的一种常用的方法，而淀粉酶可以水解淀粉成为还原糖（葡萄糖），所以你只需取一定量的淀粉，加一定量的淀粉酶，控制好酶作用的条件，然后灭酶活，接着采用DNS法测定其中的还原糖含量，从而推算出酶活大小
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分享信息，提高自己
2楼2012-06-07 17:25:57
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microblue

银虫 (小有名气)
生化实验书上就有吧
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3楼2012-06-07 19:43:28
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protein_

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流~ 2012-06-10 18:13:13
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS，沸水浴5min，迅速冷却，定容至15mL，520nm下测定OD值。
参比：将酶液用氢氧化钠灭活，然后加入淀粉，其他步骤相同。
空白：利用1mL蒸馏水代替1mL反应液，其他步骤相同。
酶活力单位定义：上述条件下底物在1min催化生产1μmol还原糖的酶量定义为一个酶活力单位U（绝干）。
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4楼2012-06-08 10:17:16
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