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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
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songtuo1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活

请问各位大仙，有谁知道如何用DNS法测α-淀粉酶酶活吗？小弟最近正愁这事呢，有人知道的话，教小弟具体步骤吧，急
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1楼 2012-06-07 16:19:05
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protein_

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流~ 2012-06-10 18:13:13
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS，沸水浴5min，迅速冷却，定容至15mL，520nm下测定OD值。
参比：将酶液用氢氧化钠灭活，然后加入淀粉，其他步骤相同。
空白：利用1mL蒸馏水代替1mL反应液，其他步骤相同。
酶活力单位定义：上述条件下底物在1min催化生产1μmol还原糖的酶量定义为一个酶活力单位U（绝干）。
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4楼2012-06-08 10:17:16
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 23:06:34
DNS法其实是测定还原糖含量的一种常用的方法，而淀粉酶可以水解淀粉成为还原糖（葡萄糖），所以你只需取一定量的淀粉，加一定量的淀粉酶，控制好酶作用的条件，然后灭酶活，接着采用DNS法测定其中的还原糖含量，从而推算出酶活大小
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分享信息，提高自己
2楼2012-06-07 17:25:57
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microblue

银虫 (小有名气)
生化实验书上就有吧
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3楼2012-06-07 19:43:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-06-09 08:39:28
引用回帖:
4楼: Originally posted by protein_ at 2012-06-08 10:17:16
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS， ...

我对这个方法有看法：
1、如果淀粉酶不能承受70度保温15分钟，就会失活，我不是空口无凭的，在这个条件下我的很多酶都会失活。
2、没有提到缓冲系统，不能在酶的降解反应中保持恒定pH值。
3、氢氧化钠没有和DNS配在一起成为一个试剂，多了一个单独用来终止酶的降解的步骤。
4、“绝干”是什么意思？真菌固体培养所得到的曲？那么酶活力怎么算？再者，如果是真菌，操作多了之后孢子会飞。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-06-09 04:35:08
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