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yesucao

木虫 (正式写手)

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[求助] 荧光定量PCR扩增曲线的分析已有1人参与

荧光定量PCR，仪器为ABI公司的7500，使用的是探针法，用DNA进行扩增。
图1：两条黄线为阳性对照，下面两条为样品，均是两个平行样。阳性对照曲线光滑，呈S型；但是样品曲线呈折叠状，与阈值有交叉点，且高于阈值。
出现扩增曲线呈折叠状（不光滑）的原因？？且是断断续续的？？
图2：上面两条曲线为阳性对照，下面两条为样品。图2中的样品荧光扩增曲线呈水平状，出现这种情况是不是样品没有扩增啊？？
图1和图2横坐标相同，只是纵坐标不一样，两个纵坐标代表的含义有什么不同？为什么在图1中样品有明显的扩增，而在图2中它的曲却为水平状？？出现这种情况能说明我的样品扩增出来的吗？？
还望各位大虾帮忙分析一下，小女子不胜感激！！

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1楼 2012-06-06 23:42:42

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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 病毒学

【答案】应助回帖

扩增曲线纵坐标是可以变动的，你是不是调了纵坐标啊，我用的ABI7300，纵坐标有Rn vs cycle和Delta Rn vs cycle，你从Delta Rn调成Rn所以变成图2那种曲线了吧？图2中有扩增的线对应的是图1中阳性对照吧，两条平整的线对应你图1中混乱的两条线，应该说明没扩增。我也是新人，刚学的这个，有错的地方希望大神指正。