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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR扩增曲线的分析
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR扩增曲线的分析 已有1人参与

荧光定量PCR，仪器为ABI公司的7500，使用的是探针法，用DNA进行扩增。
图1：两条黄线为阳性对照，下面两条为样品，均是两个平行样。阳性对照曲线光滑，呈S型；但是样品曲线呈折叠状，与阈值有交叉点，且高于阈值。
出现扩增曲线呈折叠状（不光滑）的原因？？且是断断续续的？？
图2：上面两条曲线为阳性对照，下面两条为样品。图2中的样品荧光扩增曲线呈水平状，出现这种情况是不是样品没有扩增啊？？
图1和图2横坐标相同，只是纵坐标不一样，两个纵坐标代表的含义有什么不同？为什么在图1中样品有明显的扩增，而在图2中它的曲却为水平状？？出现这种情况能说明我的样品扩增出来的吗？？
还望各位大虾帮忙分析一下，小女子不胜感激！！
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1楼 2012-06-06 23:42:42
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yesucao

木虫 (正式写手)
没人回答么？、自己顶一下，免得沉了
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2楼2012-06-07 10:59:36
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zgb1982

木虫 (正式写手)
不懂，顶一下
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3楼2012-06-07 14:22:26
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suyouzhen

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yesucao: 金币+2 2012-06-17 23:34:15
你DNA样品纯度如何？你做过检测么？
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4楼2012-06-16 23:56:13
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by suyouzhen at 2012-06-16 23:56:13
你DNA样品纯度如何？你做过检测么？

这个关系影响很大么？？
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5楼2012-06-17 23:35:37
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suyouzhen

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-18 13:37:11
yesucao: 金币+2 2012-06-18 19:53:01
阳性对照一般是稀释已知的DNA拷贝的纯品，你的阳性对照没有问题也说明你设计的探针也没问题。但是你的处理组的样品没有明显的扩增曲线，很有可能是样品中杂质影响了扩增反应，因为荧光定量PCR对样品的纯度要求很高。不知道你设计的探针的效率怎么样，你测过没有？
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6楼2012-06-18 01:23:30
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

扩增曲线纵坐标是可以变动的，你是不是调了纵坐标啊，我用的ABI7300，纵坐标有Rn vs cycle和Delta Rn vs cycle，你从Delta Rn调成Rn所以变成图2那种曲线了吧？图2中有扩增的线对应的是图1中阳性对照吧，两条平整的线对应你图1中混乱的两条线，应该说明没扩增。我也是新人，刚学的这个，有错的地方希望大神指正。
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啊
7楼2015-07-30 19:03:42
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永不言弃！！

铜虫 (初入文坛)
同问，我目前也碰到这种情况
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拒绝长大但要不断成长
8楼2019-08-27 13:36:26
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