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752083371

新虫 (初入文坛)

[交流] AFLP,聚丙烯酰胺胶电泳,总是出问题已有10人参与

为什么跑的条带是弧形的,而且总是中间显影的时候总是偏白或者条带出现断带,显影不一致,就是有的地方已经很黑了,而有的地方还不明显,上的样是没有问题的,经过琼脂糖电泳检测过。这几天总是这样,头疼了。。。。
电泳胶配方:50ml的4.5%聚丙烯酰胺胶, 250ml的过硫酸铵,70微升的TEMD.


4.5%聚丙烯酰胺胶:40%的聚丙烯酰胺胶 113ml, 10× TBE Buffer50ml,  尿素420.42g
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

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小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-05-27 17:29:18
(1)按你的用量电泳胶配方应该是:50ml的4.5%聚丙烯酰胺胶, 250ul的过硫酸铵,50ul的TEMD.(我们实验室是按这个比例混合的);TEMED加大量会加速凝,但是凝的速度过快胶会不匀,影响跑胶的质量。APS一般现配最好。 梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。在倒胶之前要好好的混匀,剧烈一点都没有关系,一定一定要混匀。
(2)显影不均匀,可能也与胶有关系,灌胶不均匀;银染时硝酸银一定要完全溶解;
2楼2012-05-26 17:43:20
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

把你的图发上来看看
3楼2012-05-28 21:25:54
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liugs

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流! 2012-05-29 18:55:13
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4楼2012-05-29 16:38:16
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shucanwei

木虫 (正式写手)

楼上分析得有道理!
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
5楼2012-06-12 22:27:10
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-15 13:51:57
胶得混匀,染色洗胶液要摇匀,胶与胶分开不能贴一起。弧型与你点样和胶有一定的关系,点样时样成滴状到加样孔的底部,不要弥散!加的时候慢点打入 不能喷!
低调稳重务实内敛---------------残
6楼2012-06-15 11:59:50
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artemis1983

新虫 (初入文坛)


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也有可能是加的电压太大,我一般是低电压过夜跑,效果比较好
7楼2012-06-15 14:05:26
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tlliu80

金虫 (初入文坛)


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叫微笑DNA离子强度不均匀(电场不均匀),胶温度高了
8楼2013-05-04 14:50:26
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小涯于重庆

铁虫 (小有名气)


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请问你的问题解决么?
好好学习,天天向上。
9楼2015-04-18 18:11:08
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wzt1417

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主您好,最近我在做AFLP选择性扩增的聚丙烯酰胺电泳,但泳道颜色很深,都影响观察条带了,染色方面不是很过,就是泳道背景颜色深,跟条带块差不多了,求解答,谢谢!
10楼2015-09-04 20:59:52
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