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新虫 (初入文坛)

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[交流] AFLP，聚丙烯酰胺胶电泳，总是出问题已有10人参与

为什么跑的条带是弧形的，而且总是中间显影的时候总是偏白或者条带出现断带，显影不一致，就是有的地方已经很黑了，而有的地方还不明显，上的样是没有问题的，经过琼脂糖电泳检测过。这几天总是这样，头疼了。。。。
电泳胶配方：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ml的过硫酸铵，70微升的TEMD.

4.5％聚丙烯酰胺胶：40％的聚丙烯酰胺胶 113ml， 10× TBE Buffer50ml，尿素420.42g

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1楼 2012-05-25 14:39:41

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artemis1983

新虫 (初入文坛)

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也有可能是加的电压太大，我一般是低电压过夜跑，效果比较好

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7楼2012-06-15 14:05:26

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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

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小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-05-27 17:29:18

（1）按你的用量电泳胶配方应该是：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ul的过硫酸铵，50ul的TEMD.（我们实验室是按这个比例混合的）；TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般现配最好。梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。在倒胶之前要好好的混匀，剧烈一点都没有关系，一定一定要混匀。
（2）显影不均匀，可能也与胶有关系，灌胶不均匀；银染时硝酸银一定要完全溶解；

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2楼2012-05-26 17:43:20

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