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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » AFLP，聚丙烯酰胺胶电泳，总是出问题
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752083371

新虫 (初入文坛)

[交流] AFLP，聚丙烯酰胺胶电泳，总是出问题 已有10人参与

为什么跑的条带是弧形的，而且总是中间显影的时候总是偏白或者条带出现断带，显影不一致，就是有的地方已经很黑了，而有的地方还不明显，上的样是没有问题的，经过琼脂糖电泳检测过。这几天总是这样，头疼了。。。。
电泳胶配方：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ml的过硫酸铵，70微升的TEMD.


4.5％聚丙烯酰胺胶：40％的聚丙烯酰胺胶 113ml， 10× TBE Buffer50ml，  尿素420.42g
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1楼 2012-05-25 14:39:41
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-05-27 17:29:18
（1）按你的用量电泳胶配方应该是：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ul的过硫酸铵，50ul的TEMD.（我们实验室是按这个比例混合的）；TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般现配最好。 梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。在倒胶之前要好好的混匀，剧烈一点都没有关系，一定一定要混匀。
（2）显影不均匀，可能也与胶有关系，灌胶不均匀；银染时硝酸银一定要完全溶解；
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2楼2012-05-26 17:43:20
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cxb-abc

银虫 (小有名气)
把你的图发上来看看
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3楼2012-05-28 21:25:54
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liugs

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-05-29 18:55:13
本帖内容被屏蔽
4楼2012-05-29 16:38:16
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shucanwei

木虫 (正式写手)
楼上分析得有道理！
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
5楼2012-06-12 22:27:10
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-15 13:51:57
胶得混匀，染色洗胶液要摇匀，胶与胶分开不能贴一起。弧型与你点样和胶有一定的关系，点样时样成滴状到加样孔的底部，不要弥散!加的时候慢点打入 不能喷！
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低调稳重务实内敛---------------残
6楼2012-06-15 11:59:50
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artemis1983

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
也有可能是加的电压太大，我一般是低电压过夜跑，效果比较好
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7楼2012-06-15 14:05:26
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tlliu80

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
叫微笑DNA离子强度不均匀（电场不均匀），胶温度高了
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8楼2013-05-04 14:50:26
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小涯于重庆

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你的问题解决么？
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好好学习，天天向上。
9楼2015-04-18 18:11:08
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wzt1417

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主您好，最近我在做AFLP选择性扩增的聚丙烯酰胺电泳，但泳道颜色很深，都影响观察条带了，染色方面不是很过，就是泳道背景颜色深，跟条带块差不多了，求解答，谢谢！
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10楼2015-09-04 20:59:52
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