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752083371

新虫 (初入文坛)

[交流] AFLP,聚丙烯酰胺胶电泳,总是出问题 已有10人参与

为什么跑的条带是弧形的,而且总是中间显影的时候总是偏白或者条带出现断带,显影不一致,就是有的地方已经很黑了,而有的地方还不明显,上的样是没有问题的,经过琼脂糖电泳检测过。这几天总是这样,头疼了。。。。
电泳胶配方:50ml的4.5%聚丙烯酰胺胶, 250ml的过硫酸铵,70微升的TEMD.


4.5%聚丙烯酰胺胶:40%的聚丙烯酰胺胶 113ml, 10× TBE Buffer50ml,  尿素420.42g
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-15 13:51:57
胶得混匀,染色洗胶液要摇匀,胶与胶分开不能贴一起。弧型与你点样和胶有一定的关系,点样时样成滴状到加样孔的底部,不要弥散!加的时候慢点打入 不能喷!
低调稳重务实内敛---------------残
6楼2012-06-15 11:59:50
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-05-27 17:29:18
(1)按你的用量电泳胶配方应该是:50ml的4.5%聚丙烯酰胺胶, 250ul的过硫酸铵,50ul的TEMD.(我们实验室是按这个比例混合的);TEMED加大量会加速凝,但是凝的速度过快胶会不匀,影响跑胶的质量。APS一般现配最好。 梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。在倒胶之前要好好的混匀,剧烈一点都没有关系,一定一定要混匀。
(2)显影不均匀,可能也与胶有关系,灌胶不均匀;银染时硝酸银一定要完全溶解;
2楼2012-05-26 17:43:20
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

把你的图发上来看看
3楼2012-05-28 21:25:54
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liugs

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流! 2012-05-29 18:55:13
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4楼2012-05-29 16:38:16
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