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752083371

新虫 (初入文坛)

[交流] AFLP，聚丙烯酰胺胶电泳，总是出问题 已有10人参与

为什么跑的条带是弧形的，而且总是中间显影的时候总是偏白或者条带出现断带，显影不一致，就是有的地方已经很黑了，而有的地方还不明显，上的样是没有问题的，经过琼脂糖电泳检测过。这几天总是这样，头疼了。。。。
电泳胶配方：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ml的过硫酸铵，70微升的TEMD.


4.5％聚丙烯酰胺胶：40％的聚丙烯酰胺胶 113ml， 10× TBE Buffer50ml，  尿素420.42g
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1楼 2012-05-25 14:39:41
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-15 13:51:57
胶得混匀，染色洗胶液要摇匀，胶与胶分开不能贴一起。弧型与你点样和胶有一定的关系，点样时样成滴状到加样孔的底部，不要弥散!加的时候慢点打入 不能喷！
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低调稳重务实内敛---------------残
6楼2012-06-15 11:59:50
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-05-27 17:29:18
（1）按你的用量电泳胶配方应该是：50ml的4.5％聚丙烯酰胺胶， 250ul的过硫酸铵，50ul的TEMD.（我们实验室是按这个比例混合的）；TEMED加大量会加速凝，但是凝的速度过快胶会不匀，影响跑胶的质量。APS一般现配最好。 梳子带水也会影响梳子附近胶的凝固的。在倒胶之前要好好的混匀，剧烈一点都没有关系，一定一定要混匀。
（2）显影不均匀，可能也与胶有关系，灌胶不均匀；银染时硝酸银一定要完全溶解；
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2楼2012-05-26 17:43:20
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cxb-abc

银虫 (小有名气)
把你的图发上来看看
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3楼2012-05-28 21:25:54
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liugs

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-05-29 18:55:13
本帖内容被屏蔽
4楼2012-05-29 16:38:16
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