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DGGE跑胶时出现一坨的苦恼！！！
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求指教： 我用DGGE法做土壤里的细菌群落，DNA是用OMEGA的试剂盒提的，效果不错，PCR用巢式，第一轮引物F27和R1492，第二轮引物GC-338F和518R，琼脂糖电泳结果也挺亮的。DGGE用的8%的胶，40%-60%，60V，15h，然后银染，出来的结果全是下边出现两坨，然后再往下就没有条带了。刚开始做DGGE，自己摸索，不断出现问题，特在此请教各位专家，要怎样解决这个坨的问题呢？？？ 还有，跑第一次DGGE后，拿去测序，套峰太多，又拿第一次切胶后的产物做了PCR，条件与第二轮PCR相同，然后又跑了一次DGGE，有一个主条带，但还是有好几个细条带，想接着进行测序，应该怎么办呢？？如果是做克隆，挑多少斑比较好呢？  巢式PCR之后的结果  第一次DGGE结果  不好意思，这个传错了，嘻嘻，没弄明白在哪儿删除  第一次DGGE切胶后结果  第一次切胶后的PCR产物进行第二次DGGE后的结果  第二次DGGE后切胶PCR的结果 |
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xiadongliang
金虫 (正式写手)
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3楼2012-06-01 10:34:16