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madengyu

禁虫 (小有名气)

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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by madengyu at 2012-05-17 19:51:03:
pMD18-T载体 2692bp,目的基因片段 2934bp。重组质粒5692bp。
酶切后应该显示目的条带2934bp,T载体2692bp。
HindIII和NotI双酶切缓冲液是0.5K+BSA,只是各加了1ul。

你marker最大的带是多少?2700bp和2900bp很难分的。
未来不是梦
5楼2012-05-17 22:02:13
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:43
你的质粒是多大的,酶切后应该是多大的片段?
还有就是用HindIII和NotI双酶切是0.5K+BSA,应该是1ul的K Buffer和2ul的BSA。
未来不是梦
2楼2012-05-17 17:56:11
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madengyu

禁虫 (小有名气)

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3楼2012-05-17 19:51:03
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:53
我建议你分别用HindIII和NotI做单酶切看看,是哪一个酶的酶切有问题,可能是酶失活,或者酶切条件不合适导致某一个酶的酶切失败。当然,最简单的办法是直接送质粒进行序列分析,就知道是否由序列突变导致酶切位点消失。
4楼2012-05-17 22:00:51
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