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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2012-05-17 17:06:50
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by madengyu at 2012-05-17 19:51:03:
pMD18-T载体 2692bp，目的基因片段 2934bp。重组质粒5692bp。
酶切后应该显示目的条带2934bp，T载体2692bp。
HindIII和NotI双酶切缓冲液是0.5K+BSA，只是各加了1ul。

你marker最大的带是多少？2700bp和2900bp很难分的。
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未来不是梦
5楼2012-05-17 22:02:13
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:43
你的质粒是多大的，酶切后应该是多大的片段？
还有就是用HindIII和NotI双酶切是0.5K+BSA，应该是1ul的K Buffer和2ul的BSA。
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未来不是梦
2楼2012-05-17 17:56:11
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madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-05-17 19:51:03
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:53
我建议你分别用HindIII和NotI做单酶切看看，是哪一个酶的酶切有问题，可能是酶失活，或者酶切条件不合适导致某一个酶的酶切失败。当然，最简单的办法是直接送质粒进行序列分析，就知道是否由序列突变导致酶切位点消失。
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4楼2012-05-17 22:00:51
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