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黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
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我用的方法如下： 木素过氧化物酶（LiP）测定：取 0.2mL 藜芦醇溶液（10mmol•L-1）、0.4mL 酒石酸缓冲液（250mmol•L-1，pH=3.0）与 0.4mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 310nm 处 2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生 1μmol藜芦醛所需的酶量。 锰过氧化物酶（MnP）测定：将 0.2113g MnSO4溶解于 1L 酒石酸缓冲液（50mmol•L-1，pH=4.5）中，取 0.8mL 该溶液同 0.2mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 290nm 处2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化 Mn2+产生 1μmol Mn3+所需的酶量。 漆酶采用ABTS法 但测出吸光度是负值，请大家帮忙分析一下并提出宝贵意见，还有不解的是怎么把吸光度的变化转化为酶活，还有就是测定2min钟前后的吸光度变化，这两分钟怎么选取，随便选取两分钟即可吗，或者大家有没有测这几种酶的具体方法，能否分享一下，拜托各位了！ [ Last edited by fanxiaojuan on 2012-5-17 at 17:05 ] |
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fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
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漆酶最适 p H 值的测定方法 在 25 ℃时，以 2mLBritton2Robinson 缓冲溶液，外加 1 mL 用蒸馏水稀释 104 倍的漆酶液为空白；先设定参数，使吸光度自动归零。取 1 mL 相应 pH 值的Britton2Robinson 缓冲溶液，用蒸馏水 1 mL 稀释104 倍的漆酶液 ，再加 1 mL 的 1 mmol/ L AB TS 溶液于比色皿启动反应，同时用 UV - 2201 型紫外 - 可见分光光度计的 TIME2COURSE 程序记录吸光度在420 nm 波长处 4 min 内的时间历程 ，取该曲线最初部分的斜率为酶反应的速度，酶反应速度最大时对应的 pH 值为漆酶的最适 pH 值。 查文献知漆酶酶活最适pH为4.5。 3.3.1.3 漆酶稀释倍数及酶活力的测定方法 取酶液0.1ml，加入Hac-NaAc（pH4.5）缓冲液2.5ml，混匀，加入ABTS0.4ml，放置30s，每15s读取一次420nm下吸光值。共读取6～7个数值。以经验判断，若吸光值增长迅速，则将酶液稀释2～5倍再次测定，直至吸光值数值变化不是太快，且数值均在0.2～0.8之间。酶活的计算：吸光度变化的斜率×4000×稀释倍数。 |
19楼2012-05-17 19:31:49
13楼2012-05-17 19:05:12
闲来逛逛……14楼2012-05-17 19:09:05
简单回复
2012-05-17 18:49
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fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
86739294910楼
2012-05-17 18:54
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