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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 养细胞的高手帮我分析一下
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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] 养细胞的高手帮我分析一下

细胞里出现了小黑点，貌似不影响细胞的生长，传代也没什么问题，但是做了两次细胞转染，都没什么阳性的克隆细胞，又仔细观察了细胞，好像细胞质里有什么东西，细胞变黑了，有很多小黑点，细胞外也有小黑点。究竟什么原因呀？明年就要毕业了，要转染出的蛋白继续试验呢，愁呀，希望养细胞的高手给我点建议，多谢啦！
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1楼 2012-05-17 08:40:20
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wanglei512

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 沈郁安 at 2012-05-18 14:54:44:
是加了血清的培养基，在换液之前过滤，滤器的孔径选小一点。

我们实验室也遇到过，小黑点在显微镜下会做类似布朗运动，刚开始只有几个，随着传代次数增加，小黑点会布满整个胞质。有人说是血清里面的东西，一些配置高的显微镜才可以看到。有人说是黑胶虫，细胞死亡速度很快，建议你把所有能扔的都扔了，好好灭菌打扫细胞室。重新采样，再养吧。用啥抗生素都没用，早扔早托生。
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10楼2012-05-18 17:30:42
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沈郁安

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanalice: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-05-17 09:39:16
（1）细胞支原体污染，这个我以前遇到过，无法解决
（2）细胞代谢物，建议在操作时多用PBS洗几次，培养基用滤器过滤，把细胞多传几个瓶子，减少密度试试。
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跌倒再爬起，成功属于一步一个脚印踏踏实实、全面了解信息的人
2楼2012-05-17 09:27:01
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yuanalice

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
silicare: 金币+1, 应助指数+1 2012-05-19 10:16:59
引用回帖:
2楼: Originally posted by 沈郁安 at 2012-05-17 09:27:01:
（1）细胞支原体污染，这个我以前遇到过，无法解决
（2）细胞代谢物，建议在操作时多用PBS洗几次，培养基用滤器过滤，把细胞多传几个瓶子，减少密度试试。

支原体污染在显微镜下是不是看不见呀，培养基用滤器过滤，是指加过血清的培养基吗？多谢啦！
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3楼2012-05-17 09:41:13
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ciqql

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+5, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-17 20:23:06
是细胞培养中很容易出现，但是又容易被很多学生忽略的一个问题，根据你描述的现象，很可能是支原体、衣原体之类的污染，过滤培养液的膜，孔径太大，无法有效去除支原体这么小的东西，建议以后实验中，对血清的灭活做的更仔细的，
这种污染最讨厌，最好的办法是全部扔掉，重新复苏，万一再没有细胞了，传代、稀释都勤快点，让支原体处于一个较低的水平，做完试验后，立刻扔掉所有细胞，这种情况有时会影响好几代研究生
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4楼2012-05-17 16:32:01
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