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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] 养细胞的高手帮我分析一下

细胞里出现了小黑点,貌似不影响细胞的生长,传代也没什么问题,但是做了两次细胞转染,都没什么阳性的克隆细胞,又仔细观察了细胞,好像细胞质里有什么东西,细胞变黑了,有很多小黑点,细胞外也有小黑点。究竟什么原因呀?明年就要毕业了,要转染出的蛋白继续试验呢,愁呀,希望养细胞的高手给我点建议,多谢啦!
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞状态不行了,很有可能是细胞状态不行,死细胞多,细胞碎片就多,我们习惯把它叫做胶原虫,其实应该是细胞碎片。
6楼2012-05-18 08:15:49
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普通回帖

沈郁安

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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yuanalice: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-05-17 09:39:16
(1)细胞支原体污染,这个我以前遇到过,无法解决
(2)细胞代谢物,建议在操作时多用PBS洗几次,培养基用滤器过滤,把细胞多传几个瓶子,减少密度试试。
跌倒再爬起,成功属于一步一个脚印踏踏实实、全面了解信息的人
2楼2012-05-17 09:27:01
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yuanalice

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


silicare: 金币+1, 应助指数+1 2012-05-19 10:16:59
引用回帖:
2楼: Originally posted by 沈郁安 at 2012-05-17 09:27:01:
(1)细胞支原体污染,这个我以前遇到过,无法解决
(2)细胞代谢物,建议在操作时多用PBS洗几次,培养基用滤器过滤,把细胞多传几个瓶子,减少密度试试。

支原体污染在显微镜下是不是看不见呀,培养基用滤器过滤,是指加过血清的培养基吗?多谢啦!
3楼2012-05-17 09:41:13
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ciqql

新虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
amisking: 金币+5, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-17 20:23:06
是细胞培养中很容易出现,但是又容易被很多学生忽略的一个问题,根据你描述的现象,很可能是支原体、衣原体之类的污染,过滤培养液的膜,孔径太大,无法有效去除支原体这么小的东西,建议以后实验中,对血清的灭活做的更仔细的,
这种污染最讨厌,最好的办法是全部扔掉,重新复苏,万一再没有细胞了,传代、稀释都勤快点,让支原体处于一个较低的水平,做完试验后,立刻扔掉所有细胞,这种情况有时会影响好几代研究生
4楼2012-05-17 16:32:01
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水一315

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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yqbter: 金币+1, 很好的回答! 2012-05-18 12:54:00
内容已删除
What ever is worth doing is worth doing well.
5楼2012-05-18 01:09:27
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dennis198721

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很可能是支原体污染,对于这个没什么办法,只能更换了
7楼2012-05-18 08:47:49
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是黑胶虫污染,细胞只能丢弃了,培养箱也需要彻底消毒
8楼2012-05-18 14:24:48
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沈郁安

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuanalice at 2012-05-17 09:41:13:
支原体污染在显微镜下是不是看不见呀,培养基用滤器过滤,是指加过血清的培养基吗?多谢啦!

是加了血清的培养基,在换液之前过滤,滤器的孔径选小一点。
跌倒再爬起,成功属于一步一个脚印踏踏实实、全面了解信息的人
9楼2012-05-18 14:54:44
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wanglei512

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 沈郁安 at 2012-05-18 14:54:44:
是加了血清的培养基,在换液之前过滤,滤器的孔径选小一点。

我们实验室也遇到过,小黑点在显微镜下会做类似布朗运动,刚开始只有几个,随着传代次数增加,小黑点会布满整个胞质。有人说是血清里面的东西,一些配置高的显微镜才可以看到。有人说是黑胶虫,细胞死亡速度很快,建议你把所有能扔的都扔了,好好灭菌打扫细胞室。重新采样,再养吧。用啥抗生素都没用,早扔早托生。
10楼2012-05-18 17:30:42
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