应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大片段DNA测序的问题
81/1返回列表
查看: 1870  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wwmin

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段DNA测序的问题 已有1人参与

各位大仙，小弟最近在做线粒体DNA基因组，用了两个引物分别扩增出一条7K和一条9K左右的片段，请问不用克隆可以直接测序吗（克隆这么大的片段太难了，您懂的），如果可以的话，用什么方法，价格大约多少呢？先谢过了~Sample TextSample TextSample Text
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-13 15:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:17
PCR产物可以直接测序，前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序，你给一条引物，就说测通就行了，其他的事情测序那边会帮你做，你不用管，估计得上十个反应，有点小贵。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2012-05-13 20:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwmin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-13 20:49:57:
PCR产物可以直接测序，前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序，你给一条引物，就说测通就行了，其他的事情测序那边会帮你做，你不用管，估计得上十个反应，有点小贵。

如果是这样，那就最好了，测通估计不会很便宜吧。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-13 23:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
3楼: Originally posted by wwmin at 2012-05-13 23:14:44:
如果是这样，那就最好了，测通估计不会很便宜吧。

也不会很贵了，现在测序都萝卜价了。只是你这个片段长，反应数要多些。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
4楼2012-05-14 08:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:46
一个反应25块,7k+8K共15k，一个反应按800算，总共差不多20个反应，测序总结500块，引物的话20个反应20个条引物，除去扩增用的4条，还需16条引物，每条按均价25块算，引物大约共需400块，总计大概900块，如果设计的好的话。但有一点要注意，因为你测得反应多，所以对模板要求量也大，所以多扩点吧。其实如果只想验证是不是的话，一个反应就够了。如果要用的话，还是连到终载体上再测通吧，你这样测通没什么意义感觉！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-05-15 12:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwmin

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-27 09:20:27
引用回帖:
5楼: Originally posted by 世外清风 at 2012-05-15 12:58:33
一个反应25块,7k+8K共15k，一个反应按800算，总共差不多20个反应，测序总结500块，引物的话20个反应20个条引物，除去扩增用的4条，还需16条引物，每条按均价25块算，引物大约共需400块，总计大概900块，如果设计的好 ...

有道理谢谢了我只想知道这个序列，所以要测通的，就像您说的，要很多模版，对模版的质量要求高，不过这个不是问题，连接到载体会不会有太大了？
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-26 19:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
连确实费劲，连慢病毒的吧
我没做过这么大的，见过有大的载体，操作性是较差。要不就分段一点一点连进去
赞一下 回复此楼
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
7楼2012-05-27 09:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半天云

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不用构建载体，一代测序测通就可以了，一般一个反应18块，你这个测完估计最多也就一千块，请问你一下，你是要组装线粒体还是只研究你测序的部分，线粒体基因组测序完主要是研究物种分类和进化的，方法很多，就看你的主要目的了
赞一下 回复此楼
8楼2017-07-18 17:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwmin 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭