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wwmin

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段DNA测序的问题已有1人参与

各位大仙,小弟最近在做线粒体DNA基因组,用了两个引物分别扩增出一条7K和一条9K左右的片段,请问不用克隆可以直接测序吗(克隆这么大的片段太难了,您懂的),如果可以的话,用什么方法,价格大约多少呢?先谢过了~Sample TextSample TextSample Text
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:17
PCR产物可以直接测序,前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序,你给一条引物,就说测通就行了,其他的事情测序那边会帮你做,你不用管,估计得上十个反应,有点小贵。
Thank-you,so-blue.
2楼2012-05-13 20:49:57
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wwmin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-13 20:49:57:
PCR产物可以直接测序,前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序,你给一条引物,就说测通就行了,其他的事情测序那边会帮你做,你不用管,估计得上十个反应,有点小贵。

如果是这样,那就最好了,测通估计不会很便宜吧。
3楼2012-05-13 23:14:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
3楼: Originally posted by wwmin at 2012-05-13 23:14:44:
如果是这样,那就最好了,测通估计不会很便宜吧。

也不会很贵了,现在测序都萝卜价了。只是你这个片段长,反应数要多些。
Thank-you,so-blue.
4楼2012-05-14 08:35:09
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:46
一个反应25块,7k+8K共15k,一个反应按800算,总共差不多20个反应,测序总结500块,引物的话20个反应20个条引物,除去扩增用的4条,还需16条引物,每条按均价25块算,引物大约共需400块,总计大概900块,如果设计的好的话。但有一点要注意,因为你测得反应多,所以对模板要求量也大,所以多扩点吧。其实如果只想验证是不是的话,一个反应就够了。如果要用的话,还是连到终载体上再测通吧,你这样测通没什么意义感觉!
5楼2012-05-15 12:58:33
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wwmin

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
telomerase: 金币+4, 欢迎新虫!!! 欢迎多多交流!! 2012-05-27 09:20:27
引用回帖:
5楼: Originally posted by 世外清风 at 2012-05-15 12:58:33
一个反应25块,7k+8K共15k,一个反应按800算,总共差不多20个反应,测序总结500块,引物的话20个反应20个条引物,除去扩增用的4条,还需16条引物,每条按均价25块算,引物大约共需400块,总计大概900块,如果设计的好 ...

有道理谢谢了我只想知道这个序列,所以要测通的,就像您说的,要很多模版,对模版的质量要求高,不过这个不是问题,连接到载体会不会有太大了?
6楼2012-05-26 19:41:32
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

连确实费劲,连慢病毒的吧
我没做过这么大的,见过有大的载体,操作性是较差。要不就分段一点一点连进去
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
7楼2012-05-27 09:22:35
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半天云

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不用构建载体,一代测序测通就可以了,一般一个反应18块,你这个测完估计最多也就一千块,请问你一下,你是要组装线粒体还是只研究你测序的部分,线粒体基因组测序完主要是研究物种分类和进化的,方法很多,就看你的主要目的了
8楼2017-07-18 17:52:05
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