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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大片段DNA测序的问题
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wwmin

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段DNA测序的问题 已有1人参与

各位大仙，小弟最近在做线粒体DNA基因组，用了两个引物分别扩增出一条7K和一条9K左右的片段，请问不用克隆可以直接测序吗（克隆这么大的片段太难了，您懂的），如果可以的话，用什么方法，价格大约多少呢？先谢过了~Sample TextSample TextSample Text
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1楼 2012-05-13 15:43:13
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:17
PCR产物可以直接测序，前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序，你给一条引物，就说测通就行了，其他的事情测序那边会帮你做，你不用管，估计得上十个反应，有点小贵。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-05-13 20:49:57
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wwmin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-13 20:49:57:
PCR产物可以直接测序，前提是你要保证产物够纯。
测序方法就是常规的测序，你给一条引物，就说测通就行了，其他的事情测序那边会帮你做，你不用管，估计得上十个反应，有点小贵。

如果是这样，那就最好了，测通估计不会很便宜吧。
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3楼2012-05-13 23:14:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
3楼: Originally posted by wwmin at 2012-05-13 23:14:44:
如果是这样，那就最好了，测通估计不会很便宜吧。

也不会很贵了，现在测序都萝卜价了。只是你这个片段长，反应数要多些。
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Thank-you，so-blue.
4楼2012-05-14 08:35:09
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖应助 2012-05-27 00:33:46
一个反应25块,7k+8K共15k，一个反应按800算，总共差不多20个反应，测序总结500块，引物的话20个反应20个条引物，除去扩增用的4条，还需16条引物，每条按均价25块算，引物大约共需400块，总计大概900块，如果设计的好的话。但有一点要注意，因为你测得反应多，所以对模板要求量也大，所以多扩点吧。其实如果只想验证是不是的话，一个反应就够了。如果要用的话，还是连到终载体上再测通吧，你这样测通没什么意义感觉！
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5楼2012-05-15 12:58:33
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wwmin

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-27 09:20:27
引用回帖:
5楼: Originally posted by 世外清风 at 2012-05-15 12:58:33
一个反应25块,7k+8K共15k，一个反应按800算，总共差不多20个反应，测序总结500块，引物的话20个反应20个条引物，除去扩增用的4条，还需16条引物，每条按均价25块算，引物大约共需400块，总计大概900块，如果设计的好 ...

有道理谢谢了我只想知道这个序列，所以要测通的，就像您说的，要很多模版，对模版的质量要求高，不过这个不是问题，连接到载体会不会有太大了？
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6楼2012-05-26 19:41:32
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
连确实费劲，连慢病毒的吧
我没做过这么大的，见过有大的载体，操作性是较差。要不就分段一点一点连进去
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
7楼2012-05-27 09:22:35
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半天云

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不用构建载体，一代测序测通就可以了，一般一个反应18块，你这个测完估计最多也就一千块，请问你一下，你是要组装线粒体还是只研究你测序的部分，线粒体基因组测序完主要是研究物种分类和进化的，方法很多，就看你的主要目的了
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8楼2017-07-18 17:52:05
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