| 查看: 306 | 回复: 0 | |||
[求助]
植物谷草转氨酶电泳酶带分离不佳 如何改进 请高手指教
|
|
实验方案如下： 从保藏在-20℃冰柜中取出所需实验种子，剥去果皮，将其捣成粉末，并称取粉末0.2g加1ml提取液（0.1M Tris-HCl缓冲液，PH7.5，含0.01M KCl，0.05M EDTA-2Na，0.004M Mercaptpethanol）加0.11g PVPP，加0.3g石英砂，冰浴研磨至匀浆，4℃下5000rpm离心10分钟，吸取上清夜，再在4℃下5000rpm离心10分钟，样品现制现用。 电泳时间：100v3.5小时 200v17小时 染色方法 1. 将电泳完毕并经双蒸水冲洗3次的凝胶放入冷的0.1M PH7.5的Tris-HCl缓冲液（配方为：6.06gTris用双蒸水定容到500ml，用浓盐酸调PH到7.5）中浸泡10分钟。 2. 然后倒出缓冲液，加入溶液（配方为：17ml PH7.5的0.2ML-天冬氨酸钠盐+5ml PH7.5的0.2M α-酮戊二酸+10ml0.1 M的硝酸钙+ PH7.5的68ml 0.1Tris-HCl缓冲液+2g PVPP，在磁力搅拌器上充分搅拌溶解），在37℃下保温15分钟。 3. 倒出溶液，用双蒸水冲洗2次，加入已充分溶解并经过滤的溶液（配方为：PH7.5的100 ml 0.1M Tris-HCl缓冲液+200mg固蓝BB盐），在黑暗的37℃下保温30分钟。 4. 酶带呈色满意，倒出染液，用自来水冲洗后照相。 请高人给予进过检验的最佳实验方案以及实验中细节，本人不胜感谢！！！  电泳结果  凝胶体系 |
回复此楼» 猜你喜欢
最失望的一年
已经有8人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有27人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
推荐一本书
已经有16人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
高手帮忙分析一下弹簧钢60si2crva的晶粒度，已经经过QP热处理工艺(淬火碳分配)处理了
已经有11人回复
- 找不到合适的分离方法，求助~
已经有11人回复
- 液相色谱分离条件的优化
已经有9人回复
- 液相分离度溶液稳定性考察指标
已经有10人回复
- （实验）在石英砂中种植玉米幼苗出现这种问题，什么原因，如何避免？
已经有4人回复
- 高效液相色谱 关于有关物质的分离
已经有17人回复
- 关于微CT扫描图像处理过程中物质相的分离方法（即阈值确定问题）
已经有13人回复
- 重组质粒酶切的电泳图
已经有6人回复
- 植物RNA提取后电泳检测
已经有16人回复
- 蛋白电泳进入分离胶前没有压缩成一条直线
已经有14人回复
- 有没有人知道哪里可以代测植物激素？
已经有26人回复
- Bio-rad蛋白电泳的问题请教，有图，希望有经验者多多指教！
已经有27人回复
- 【求助】如何分离甲醇和苯，请高手指教
已经有13人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人