24小时热门版块排行榜    

查看: 3660  |  回复: 14

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳进入分离胶前没有压缩成一条直线

最近是屋漏偏逢连阴雨...制胶的玻璃让我打碎一块之后,又突然发现跑的蛋白电泳不能在进入分离胶之前压缩成一条细线。。。之前都挺正常的。。。

条件如下:
积层胶:5%,90V
分离胶:15%,19V
加样量20uL,10孔,1mm板

已经跑了三次了,都不是一条细线,今天跑的如图。

重配了电解缓冲液,过硫酸铵,还是这个样。。呃。。。

因为最近跑的条带都没有原来的细,条带也模糊,所以在到处找原因。。。


在分离胶和积层胶界面处


近距离观察发现前沿是一条很细很整齐的线,后面是我宽宽的样品电泳带。以前没仔细观察过,不知道这样正常么?

近距离观察

最后跑完的样子



[ Last edited by baby1_9253344 on 2012-4-28 at 20:18 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ego369 at 2012-04-29 10:43:34:
你首先看一下你的浓缩胶的PH值是不是正确的,再就是上样缓冲液配的是否正确!希望对你有帮助

好的,多谢,我排查一下各个pH...

上样缓冲液是marker里自带的,有溴酚蓝SDS的,1M DTT是我自己配的,溶在0.01M醋酸钠里...不知道会出问题吗?
我上几次跑的电泳正常的时候用的就是自己配的DTT,染出来的条带是没问题的,但是条带,一直没注意。
6楼2012-04-29 11:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

boying0928

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+2 2012-04-30 12:29:41
可能是电压太大的问题,还有就是上样量不雅太大。
热爱这里。
2楼2012-04-28 22:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+1 2012-04-30 12:29:51
会不会是分离胶太多,导致浓缩胶太少,梳子的孔插入到分离胶中,导致无法浓缩。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2012-04-29 09:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-04-29 09:39:39:
会不会是分离胶太多,导致浓缩胶太少,梳子的孔插入到分离胶中,导致无法浓缩。

"梳子的孔插入到分离胶中"...这个肯定不会了...梳子下面的积层胶还有大概2-3cm...想请教一下出现这种现象一般可能的原因有哪些呢?
4楼2012-04-29 10:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ego369

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+2 2012-04-30 12:29:58
你首先看一下你的浓缩胶的PH值是不是正确的,再就是上样缓冲液配的是否正确!希望对你有帮助
5楼2012-04-29 10:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by boying0928 at 2012-04-28 22:17:37:
可能是电压太大的问题,还有就是上样量不雅太大。

电压一直都是这样,之前就没有问题。

上样量太大所以原有长度的堆积胶不能把它压缩成细线是吗?
7楼2012-04-29 11:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ego369

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by baby1_9253344 at 2012-04-29 11:16:27:
好的,多谢,我排查一下各个pH...

上样缓冲液是marker里自带的,有溴酚蓝SDS的,1M DTT是我自己配的,溶在0.01M醋酸钠里...不知道会出问题吗?
我上几次跑的电泳正常的时候用的就是自己配的DTT,染出来的条带 ...

你的那块胶应该也没问题的,你可以染色脱色完看一下,应该没什么太大的影响
8楼2012-04-29 16:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ego369 at 2012-04-29 16:56:00:
你的那块胶应该也没问题的,你可以染色脱色完看一下,应该没什么太大的影响

染色脱色了,发现条带(包括marker)都很模糊,而且下面的(小分子量)的地方应该有条带的位置什么都没有。。。
9楼2012-04-29 17:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+1 2012-04-30 12:30:16
我觉得这个无所谓  关键是蛋白跑得如何
很多时候看起来很糟糕 但是并不影响蛋白的迁移
10楼2012-04-30 01:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baby1_9253344 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +10 yangfz 2026-03-17 10/500 2026-03-18 20:14 by walc
[考研] 271材料工程求调剂 +4 .6lL 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:05 by 楤哥
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 材料与化工求调剂 +6 为学666 2026-03-16 6/300 2026-03-17 20:15 by peike
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见