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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳进入分离胶前没有压缩成一条直线

最近是屋漏偏逢连阴雨...制胶的玻璃让我打碎一块之后,又突然发现跑的蛋白电泳不能在进入分离胶之前压缩成一条细线。。。之前都挺正常的。。。

条件如下:
积层胶:5%,90V
分离胶:15%,19V
加样量20uL,10孔,1mm板

已经跑了三次了,都不是一条细线,今天跑的如图。

重配了电解缓冲液,过硫酸铵,还是这个样。。呃。。。

因为最近跑的条带都没有原来的细,条带也模糊,所以在到处找原因。。。


在分离胶和积层胶界面处


近距离观察发现前沿是一条很细很整齐的线,后面是我宽宽的样品电泳带。以前没仔细观察过,不知道这样正常么?

近距离观察

最后跑完的样子



[ Last edited by baby1_9253344 on 2012-4-28 at 20:18 ]
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ego369 at 2012-04-29 10:43:34:
你首先看一下你的浓缩胶的PH值是不是正确的,再就是上样缓冲液配的是否正确!希望对你有帮助

好的,多谢,我排查一下各个pH...

上样缓冲液是marker里自带的,有溴酚蓝SDS的,1M DTT是我自己配的,溶在0.01M醋酸钠里...不知道会出问题吗?
我上几次跑的电泳正常的时候用的就是自己配的DTT,染出来的条带是没问题的,但是条带,一直没注意。
6楼2012-04-29 11:16:27
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普通回帖

boying0928

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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baby1_9253344: 金币+2 2012-04-30 12:29:41
可能是电压太大的问题,还有就是上样量不雅太大。
热爱这里。
2楼2012-04-28 22:17:37
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+1 2012-04-30 12:29:51
会不会是分离胶太多,导致浓缩胶太少,梳子的孔插入到分离胶中,导致无法浓缩。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2012-04-29 09:39:39
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-04-29 09:39:39:
会不会是分离胶太多,导致浓缩胶太少,梳子的孔插入到分离胶中,导致无法浓缩。

"梳子的孔插入到分离胶中"...这个肯定不会了...梳子下面的积层胶还有大概2-3cm...想请教一下出现这种现象一般可能的原因有哪些呢?
4楼2012-04-29 10:37:48
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ego369

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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baby1_9253344: 金币+2 2012-04-30 12:29:58
你首先看一下你的浓缩胶的PH值是不是正确的,再就是上样缓冲液配的是否正确!希望对你有帮助
5楼2012-04-29 10:43:34
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by boying0928 at 2012-04-28 22:17:37:
可能是电压太大的问题,还有就是上样量不雅太大。

电压一直都是这样,之前就没有问题。

上样量太大所以原有长度的堆积胶不能把它压缩成细线是吗?
7楼2012-04-29 11:18:41
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ego369

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by baby1_9253344 at 2012-04-29 11:16:27:
好的,多谢,我排查一下各个pH...

上样缓冲液是marker里自带的,有溴酚蓝SDS的,1M DTT是我自己配的,溶在0.01M醋酸钠里...不知道会出问题吗?
我上几次跑的电泳正常的时候用的就是自己配的DTT,染出来的条带 ...

你的那块胶应该也没问题的,你可以染色脱色完看一下,应该没什么太大的影响
8楼2012-04-29 16:56:00
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ego369 at 2012-04-29 16:56:00:
你的那块胶应该也没问题的,你可以染色脱色完看一下,应该没什么太大的影响

染色脱色了,发现条带(包括marker)都很模糊,而且下面的(小分子量)的地方应该有条带的位置什么都没有。。。
9楼2012-04-29 17:15:01
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+1 2012-04-30 12:30:16
我觉得这个无所谓  关键是蛋白跑得如何
很多时候看起来很糟糕 但是并不影响蛋白的迁移
10楼2012-04-30 01:47:58
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