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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白电泳进入分离胶前没有压缩成一条直线

最近是屋漏偏逢连阴雨...制胶的玻璃让我打碎一块之后，又突然发现跑的蛋白电泳不能在进入分离胶之前压缩成一条细线。。。之前都挺正常的。。。

条件如下：
积层胶：5%，90V
分离胶：15%，19V
加样量20uL，10孔，1mm板

已经跑了三次了，都不是一条细线，今天跑的如图。

重配了电解缓冲液，过硫酸铵，还是这个样。。呃。。。

因为最近跑的条带都没有原来的细，条带也模糊，所以在到处找原因。。。

在分离胶和积层胶界面处

近距离观察发现前沿是一条很细很整齐的线，后面是我宽宽的样品电泳带。以前没仔细观察过，不知道这样正常么？

近距离观察

最后跑完的样子

[ Last edited by baby1_9253344 on 2012-4-28 at 20:18 ]

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1楼2012-04-28 19:30:42

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ego369

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by baby1_9253344 at 2012-04-29 11:16:27:
好的，多谢，我排查一下各个pH...

上样缓冲液是marker里自带的，有溴酚蓝SDS的，1M DTT是我自己配的，溶在0.01M醋酸钠里...不知道会出问题吗？
我上几次跑的电泳正常的时候用的就是自己配的DTT，染出来的条带 ...

你的那块胶应该也没问题的，你可以染色脱色完看一下，应该没什么太大的影响