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植物谷草转氨酶电泳酶带分离不佳 如何改进 请高手指教
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实验方案如下： 从保藏在-20℃冰柜中取出所需实验种子，剥去果皮，将其捣成粉末，并称取粉末0.2g加1ml提取液（0.1M Tris-HCl缓冲液，PH7.5，含0.01M KCl，0.05M EDTA-2Na，0.004M Mercaptpethanol）加0.11g PVPP，加0.3g石英砂，冰浴研磨至匀浆，4℃下5000rpm离心10分钟，吸取上清夜，再在4℃下5000rpm离心10分钟，样品现制现用。 电泳时间：100v3.5小时 200v17小时 染色方法 1. 将电泳完毕并经双蒸水冲洗3次的凝胶放入冷的0.1M PH7.5的Tris-HCl缓冲液（配方为：6.06gTris用双蒸水定容到500ml，用浓盐酸调PH到7.5）中浸泡10分钟。 2. 然后倒出缓冲液，加入溶液（配方为：17ml PH7.5的0.2ML-天冬氨酸钠盐+5ml PH7.5的0.2M α-酮戊二酸+10ml0.1 M的硝酸钙+ PH7.5的68ml 0.1Tris-HCl缓冲液+2g PVPP，在磁力搅拌器上充分搅拌溶解），在37℃下保温15分钟。 3. 倒出溶液，用双蒸水冲洗2次，加入已充分溶解并经过滤的溶液（配方为：PH7.5的100 ml 0.1M Tris-HCl缓冲液+200mg固蓝BB盐），在黑暗的37℃下保温30分钟。 4. 酶带呈色满意，倒出染液，用自来水冲洗后照相。 请高人给予进过检验的最佳实验方案以及实验中细节，本人不胜感谢！！！  电泳结果  凝胶体系 |
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