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simon江

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 141.2
帖子: 56
在线: 10.3小时
虫号: 1537714
注册: 2011-12-14
专业: 发育生物学

[求助] 植物谷草转氨酶电泳酶带分离不佳如何改进请高手指教

实验方案如下：
从保藏在-20℃冰柜中取出所需实验种子，剥去果皮，将其捣成粉末，并称取粉末0.2g加1ml提取液（0.1M Tris-HCl缓冲液，PH7.5，含0.01M KCl，0.05M EDTA-2Na，0.004M Mercaptpethanol）加0.11g PVPP，加0.3g石英砂，冰浴研磨至匀浆，4℃下5000rpm离心10分钟，吸取上清夜，再在4℃下5000rpm离心10分钟，样品现制现用。

电泳时间：100v3.5小时 200v17小时
染色方法
1. 将电泳完毕并经双蒸水冲洗3次的凝胶放入冷的0.1M PH7.5的Tris-HCl缓冲液（配方为：6.06gTris用双蒸水定容到500ml，用浓盐酸调PH到7.5）中浸泡10分钟。
2. 然后倒出缓冲液，加入溶液（配方为：17ml PH7.5的0.2ML-天冬氨酸钠盐+5ml PH7.5的0.2M α-酮戊二酸+10ml0.1 M的硝酸钙+ PH7.5的68ml 0.1Tris-HCl缓冲液+2g PVPP，在磁力搅拌器上充分搅拌溶解），在37℃下保温15分钟。
3. 倒出溶液，用双蒸水冲洗2次，加入已充分溶解并经过滤的溶液（配方为：PH7.5的100 ml 0.1M Tris-HCl缓冲液+200mg固蓝BB盐），在黑暗的37℃下保温30分钟。
4. 酶带呈色满意，倒出染液，用自来水冲洗后照相。

请高人给予进过检验的最佳实验方案以及实验中细节，本人不胜感谢！！！

电泳结果

凝胶体系

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