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sunshinejiao

新虫 (初入文坛)


[交流] 请教关于MTT脾淋巴细胞增殖问题

Sample TextSample Text我做脾淋巴细胞增殖实验,无菌取脾,细胞浓度为2*10e6个/ml,96孔板,每孔100μL细胞,加入10μLConA(不同浓度)孵育72小时后,加入MTT(5mg/ml)再孵育4个小时,没有出现甲瓒结晶,在显微镜下观察,细胞还是透亮的,没有发生任何变化。我又做了一次试验,取完脾细胞,孵育20小时,直接加MTT,孵育4h,有甲瓒结晶,但是很少,而且细胞还是透亮的。我想请教各位,脾细胞在96孔板里,死细胞和活细胞怎么区分啊?我那细胞都是透亮的。还有我加入MTT没有甲瓒结晶,能说明我的细胞全部死亡了吗(MTT我用其他细胞验证过,没有问题)?非常感谢各位的回答!
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sunshinejiao

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by telomerase at 2012-05-12 00:12:31:
取的新鲜组织,脾细胞还是比较混杂的,怎么确定是淋巴细胞呢?分选了?还有你裂红吗?
MTT像你说的,做其他细胞没问题,那说明还是你的细胞的事。
至于死活,那你多铺几个孔,吸出来,胎盘蓝染染看细胞死了没

谢谢您的回答!
    我没有分选,也没有裂红,就直接取出来用ConA刺激,又做了一次,有一些甲瓒结晶,但还是有的孔没有,我觉得也是取细胞时候出了问题。
    还想问一下,细胞在96孔板里,还是贴壁了,能把细胞吸出来吗?
3楼2012-05-12 16:43:40
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★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+4, 鼓励分享和交流 2012-05-13 00:07:45
取的新鲜组织,脾细胞还是比较混杂的,怎么确定是淋巴细胞呢?分选了?还有你裂红吗?
MTT像你说的,做其他细胞没问题,那说明还是你的细胞的事。
至于死活,那你多铺几个孔,吸出来,胎盘蓝染染看细胞死了没

[ Last edited by telomerase on 2012-5-12 at 00:13 ]
2楼2012-05-12 00:12:31
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我没养过你的这个细胞
贴不贴壁,不是问题,贴了的可以消化啊,就是繁琐点而已
4楼2012-05-12 20:02:22
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-05-13 00:07:55
增值细胞做MTT,你的密度是不是高了点啊,最高查一下相关文献,看别人用多少细胞。教材上应该是推荐1000-10000cells/well
5楼2012-05-12 21:24:46
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