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sunshinejiao

新虫 (初入文坛)

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[交流] 请教关于MTT脾淋巴细胞增殖问题

Sample TextSample Text我做脾淋巴细胞增殖实验，无菌取脾，细胞浓度为2*10e6个/ml，96孔板，每孔100μL细胞，加入10μLConA（不同浓度）孵育72小时后，加入MTT（5mg/ml）再孵育4个小时，没有出现甲瓒结晶，在显微镜下观察，细胞还是透亮的，没有发生任何变化。我又做了一次试验，取完脾细胞，孵育20小时，直接加MTT，孵育4h，有甲瓒结晶，但是很少，而且细胞还是透亮的。我想请教各位，脾细胞在96孔板里，死细胞和活细胞怎么区分啊?我那细胞都是透亮的。还有我加入MTT没有甲瓒结晶，能说明我的细胞全部死亡了吗（MTT我用其他细胞验证过，没有问题）？非常感谢各位的回答!

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1楼 2012-05-11 10:36:01

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sunshinejiao

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引用回帖:

2楼: Originally posted by telomerase at 2012-05-12 00:12:31:
取的新鲜组织，脾细胞还是比较混杂的，怎么确定是淋巴细胞呢？分选了？还有你裂红吗？
MTT像你说的，做其他细胞没问题，那说明还是你的细胞的事。
至于死活，那你多铺几个孔，吸出来，胎盘蓝染染看细胞死了没

谢谢您的回答！
我没有分选，也没有裂红，就直接取出来用ConA刺激，又做了一次，有一些甲瓒结晶，但还是有的孔没有，我觉得也是取细胞时候出了问题。
还想问一下，细胞在96孔板里，还是贴壁了，能把细胞吸出来吗？