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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pfu扩增片段克隆测序
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] pfu扩增片段克隆测序

用pfu扩增的片段做克隆测序，一般需要挑几个克隆？
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1楼 2012-05-07 16:27:58
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-08 13:38:03
挑单菌的时候可以多挑几个，挑了之后pcr验证一下是否插入片段，验证正确的，pfu我一般只送1个来测序
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2楼2012-05-07 16:50:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核, 辛苦 2012-05-08 13:38:18
菌落PCR或质粒酶切验证后送一个测序就行了。
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3楼2012-05-07 18:40:34
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-05-07 16:50:43:
挑单菌的时候可以多挑几个，挑了之后pcr验证一下是否插入片段，验证正确的，pfu我一般只送1个来测序

补充一下，我的片段1800bp，可以只测一个吗？
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4楼2012-05-07 19:44:37
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-05-07 18:40:34:
菌落PCR或质粒酶切验证后送一个测序就行了。

补充一下，我的片段1800bp，可以只测一个吗？
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5楼2012-05-07 19:44:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，这回心里有底了~~ 2012-05-07 19:56:25
小丹木木: 金币+2, 专家考核 2012-05-08 13:38:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-05-07 19:44:49:
补充一下，我的片段1800bp，可以只测一个吗？

Pfu保真性不错的，你怕万一就送两个了，我们一般送一个。
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6楼2012-05-07 19:48:49
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢交流，恩，起码要三个 2012-05-07 21:32:46
可以啊，不过这个得测三个反应吧
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7楼2012-05-07 21:12:09
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-08 13:39:01
liuyu_sdili: 金币+2, 谢谢交流~~~ 2012-05-08 16:28:48
看你是哪个公司的PFU了
PFU并不是完全保真的
如果你运气好 送1-3个克隆能有正确的，运气不好的话，你送10个也不见的有正确的。
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8楼2012-05-08 08:35:50
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-09 13:53:04
你先挑几个做菌落PCR，如果对照长得不多，就少挑几个菌落，对照多的话，多挑点，防止挑到的都是假阳性。验证之后，提质粒送测序就行了。
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9楼2012-05-09 09:01:42
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:53:15
liuyu_sdili: 金币+2, ★★★很有帮助, 好的，那我先测一个 2012-05-09 16:52:14
1800一般测序都要测3个反应，PFU扩增1800正确的概率比较大的，如果时间不急就送一个慢慢测，不对再换一个送，最多一周时间吧。有钱就多送几个了，更快点。
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10楼2012-05-09 10:06:39
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