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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样判断DEAE-纤维素柱上样超载？急求！！
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崔宁

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样判断DEAE-纤维素柱上样超载？急求！！

最近在做多糖的分离与纯化，用DEAE-纤维素52柱分离，先用蒸馏水洗脱中性糖，再用缓冲液洗脱酸性糖，因为要制备均一多糖，所以想摸一个柱子的最大载样量。可是如何判断上样超载那？非常感谢！！
我自己想到这样一种方法：如果上样超载柱子不能吸附多余的酸性糖，那摩酸性糖就会随中性糖一起被蒸馏水洗脱下来，我可以先后上样两次，其中一次上样量足够小、保证不会超载，另外一次增大上样量，如果两次蒸馏水洗脱出来的质量按比例吻合，则说明没有超载，否则认为超载。我想的这种方法可以吗？还有各位高人还有其他的方法吗？
非常非常感谢！！！
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1楼 2012-05-02 13:35:46
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这还不容易，一直上样，然后测流穿，当流穿里有目的蛋白后就可以了
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2楼2012-05-02 14:26:09
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崔宁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-05-02 14:26:09:
这还不容易，一直上样，然后测流穿，当流穿里有目的蛋白后就可以了

你好，谢谢你的回复，不过神魔是流穿？能详细说一下嘛？还有我做的是多糖，非常感谢！！
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3楼2012-05-02 19:26:29
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丁晓菲

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一直上样，上多糖，足够过量的多糖，这个含量是已知的，
测穿透峰里的多糖含量，两者一相减，剩下的不就是吸附的量了么。。。
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尽负千重罪，练就不死心
4楼2012-05-03 09:27:35
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崔宁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-05-02 14:26:09:
这还不容易，一直上样，然后测流穿，当流穿里有目的蛋白后就可以了

谢谢你，明白流穿是指的神魔了，也明白你的应助意思了。呵呵，谢谢，我是一个新手请见谅。
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5楼2012-05-03 10:40:37
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崔宁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丁晓菲 at 2012-05-03 09:27:35:
一直上样，上多糖，足够过量的多糖，这个含量是已知的，
测穿透峰里的多糖含量，两者一相减，剩下的不就是吸附的量了么。。。

明白了，呵呵，非常感谢！！
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6楼2012-05-03 10:41:24
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被占了

银虫 (小有名气)
请问 你的DEAE-纤维素52柱 在哪买的？ 可以给我留一个联系方式么？谢谢！
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没有等出来的辉煌，只有做出来的成功。
7楼2013-04-18 16:02:41
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 崔宁 at 2012-05-03 10:40:37
谢谢你，明白流穿是指的神魔了，也明白你的应助意思了。呵呵，谢谢，我是一个新手请见谅。...

上样速度也有关系，太快也挂不稳会被冲下来，可以用DOE的方法摸一摸速度和上样量。
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8楼2013-04-19 13:36:26
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DOE的方法是一个神一般的存在，但是建议摸索这些上样量是看看填料说明书，你如果非要摸索最大上样量，需要进行很多次实验。如果是为了不损失样品，那按照80%推荐上样量进行操作就完全没有问题了。有些实验不是非要摸那么明白的。
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9楼2013-04-19 14:27:03
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