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崔宁

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样判断DEAE-纤维素柱上样超载?急求!!

最近在做多糖的分离与纯化,用DEAE-纤维素52柱分离,先用蒸馏水洗脱中性糖,再用缓冲液洗脱酸性糖,因为要制备均一多糖,所以想摸一个柱子的最大载样量。可是如何判断上样超载那?非常感谢!!
我自己想到这样一种方法:如果上样超载柱子不能吸附多余的酸性糖,那摩酸性糖就会随中性糖一起被蒸馏水洗脱下来,我可以先后上样两次,其中一次上样量足够小、保证不会超载,另外一次增大上样量,如果两次蒸馏水洗脱出来的质量按比例吻合,则说明没有超载,否则认为超载。我想的这种方法可以吗?还有各位高人还有其他的方法吗?
非常非常感谢!!!
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DOE的方法是一个神一般的存在,但是建议摸索这些上样量是看看填料说明书,你如果非要摸索最大上样量,需要进行很多次实验。如果是为了不损失样品,那按照80%推荐上样量进行操作就完全没有问题了。有些实验不是非要摸那么明白的。
9楼2013-04-19 14:27:03
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这还不容易,一直上样,然后测流穿,当流穿里有目的蛋白后就可以了
2楼2012-05-02 14:26:09
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崔宁

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-05-02 14:26:09:
这还不容易,一直上样,然后测流穿,当流穿里有目的蛋白后就可以了

你好,谢谢你的回复,不过神魔是流穿?能详细说一下嘛?还有我做的是多糖,非常感谢!!
3楼2012-05-02 19:26:29
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丁晓菲

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一直上样,上多糖,足够过量的多糖,这个含量是已知的,
测穿透峰里的多糖含量,两者一相减,剩下的不就是吸附的量了么。。。
尽负千重罪,练就不死心
4楼2012-05-03 09:27:35
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