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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求可以去除真菌孢子，而不去掉蛋白的离心速度！！！
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cc1000ml

金虫 (正式写手)

[求助] 求可以去除真菌孢子，而不去掉蛋白的离心速度！！！

最近在做真菌产纤维素酶的实验，在制备粗酶液的时候，离心速度一直把握不好，怕最后制备的上清有真菌的孢子，会影响最后的实验结果，弱弱的问哈，有没有同学对这方面有了解的，离心速度为多少时，既能够去除上清中的真菌孢子，又不影响蛋白的获得？
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徐无鬼
1楼 2012-04-30 09:05:52
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glucidum

金虫 (正式写手)
★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-02 08:33:33
引用回帖:
7楼: Originally posted by cc1000ml at 2012-04-30 18:49:08:
这个酶应该是水溶性的，不会析出。
  您给出的建议很具体，但是我现在面临的问题是这样的：因为酶活太低，所以我想把酶的浓度增大，上午做了透析，效果不是很好，应该是因为杂质太多了...
   这株菌的酶活非常 ...

黏度大,用膜会很痛苦的,经常累死累活的只滤出一点点。4楼朋友说的是实情,建议LZ一点考虑!不过我建议用孔径大一点的滤膜,如0.45um的。
还有，不知道LZ的粗酶液经过哪些预处理?先把粘稠的成分与目标酶分离开比较好,不知道用硫酸铵沉淀一下有没有效果?
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9楼2012-05-01 23:19:07
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-30 16:58:07
cc1000ml: 金币+2, ★有帮助 2012-04-30 18:41:57
过滤应该可以去除，尝试用滤膜。
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2楼2012-04-30 15:13:09
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glucidum

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-30 18:17:42
如果要求完全没有孢子，那请用膜过滤除菌；
离心去掉大部分孢子的话，如果在蒸馏水中（溶液黏度很低）那1000g应该足够了，如果溶液黏度大就不好说了；
LZ想要的是酶液，蛋白的分子很小，如果是水溶性蛋白，直接离心是很难把蛋白离下来的，平常万儿八千g的离心力都不会有问题。
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cc1000ml
3楼2012-04-30 17:48:31
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391579557

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励交流 2012-04-30 18:17:51
其实，个人觉得膜滤之前还是要离心的。因为“膜”这个东西用过的人都知道：用着很蛋疼。
问个问题：你的酶会在发酵中析出？
还是个人觉得：你可以做个实验：1、4000 rpm离心20分钟（我觉得这个速度初步除去孢子够了），在0.22 μm微滤酶液，测酶活；2、滤纸过滤2次，0.22 μ膜滤，测酶活。比较其差异。如果楼主想提高离心转速，可将“1”改为梯度实验。
呵呵，可能楼主会认为麻烦，纤维素酶活的滤纸法测定是酶活测定当中，比较简单的了。
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cc1000ml
求实，所以来小木虫！
4楼2012-04-30 18:12:38
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