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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] rt-pcr电泳图,求好心虫友帮助分析一下,跪谢。。。

这是今天跑得rt-pcr图,最两边的的是DL2000marker,2-9号点样孔为温度梯度(45-60度),由于提的rna有dna污染,所以消化了一下。。。1号点样孔为没有经过dnase消化的rna,也没有经过反转录,当做对比。。。 目的条带约860bp左右,1号点样孔有明显目的条带,但也有杂带,模板应该是基因组dna,但2-9号几乎没有目的条带,我想问一下是不是反转录又问题啊,由于没有内参,所以不知道是不是反转录有问题。。。 还有植物里有没有通用的内参啊,比如18s,序列为多少啊,我做的油松,找不到内参基因,求大神指点啊。。。

rna



梯度pcr
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xumin-0120

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流! 2012-05-08 18:59:38
怎么说,首先确定你的引物扩增的序列中间有没有内含子序列,没有的话,你的RNA为模版的1号就有你所要的目的片段,如果中间没有多余内含子序列,极可能是DNA。看你的RNA电泳图效果挺好的,反转录后问题也不是很大。可能是你的引物不够特异,还是先找个内参对比下比较可靠~~动物的一般是actin,植物的就不知道了。。。。
15楼2012-05-08 16:37:44
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