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weining1203新虫 (小有名气)
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[求助]
rt-pcr电泳图，求好心虫友帮助分析一下，跪谢。。。
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这是今天跑得rt-pcr图，最两边的的是DL2000marker，2-9号点样孔为温度梯度（45-60度），由于提的rna有dna污染，所以消化了一下。。。1号点样孔为没有经过dnase消化的rna，也没有经过反转录，当做对比。。。 目的条带约860bp左右，1号点样孔有明显目的条带，但也有杂带，模板应该是基因组dna，但2-9号几乎没有目的条带，我想问一下是不是反转录又问题啊，由于没有内参，所以不知道是不是反转录有问题。。。 还有植物里有没有通用的内参啊，比如18s，序列为多少啊，我做的油松，找不到内参基因，求大神指点啊。。。 rna  梯度pcr |
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mamadexiao
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 恩，鼓励提供有价值的应助哦 2012-04-25 13:55:00
weining1203: 金币+5, ★有帮助 2012-05-09 15:46:47
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我是做动物的，不知道植物的，但是，首先，你要确定你的RNA反转的好不好，先做个内参，跑个25-30CYCLE 要是觉得提的RNA不好，可以跑个电泳看看 你加酶消化的时候，处理的东西包括水，都是无RNase的吧？ 再说说你的电泳 你的1号样品，说明你的引物没有问题，提的也没啥问题，但是，你的引物条件需要优化，试试提高退火温度。 你的剩下的啥都没有P出来，有可能是你的模板的问题 最好还是做个内参吧，没内参，做啥都是个虚的，你不好确定你的东西到底好不好 |
10楼2012-04-24 21:02:01