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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] rt-pcr电泳图,求好心虫友帮助分析一下,跪谢。。。

这是今天跑得rt-pcr图,最两边的的是DL2000marker,2-9号点样孔为温度梯度(45-60度),由于提的rna有dna污染,所以消化了一下。。。1号点样孔为没有经过dnase消化的rna,也没有经过反转录,当做对比。。。 目的条带约860bp左右,1号点样孔有明显目的条带,但也有杂带,模板应该是基因组dna,但2-9号几乎没有目的条带,我想问一下是不是反转录又问题啊,由于没有内参,所以不知道是不是反转录有问题。。。 还有植物里有没有通用的内参啊,比如18s,序列为多少啊,我做的油松,找不到内参基因,求大神指点啊。。。

rna



梯度pcr
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:56:30
RNA质量没问题反转录都不会有问题的
1)按照你所说你前面不消化DNA的能扩出来,而消化过的反而扩不出来的情况可以认为你的引物是没有问题的;
2)不知道你1-9号孔是不是所有的模板都一样的浓度,如果不一样考虑一下模板弄度的问题,如果一样那应该是模板的问题,重新再做一次吧
12楼2012-04-25 13:19:58
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