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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 纯化后蛋白的SDS-PAGE
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] 纯化后蛋白的SDS-PAGE

各位看看我的蛋白纯化后电泳图，是一个膜蛋白，纯化的倒是还可以就是条带有点模糊，像是拖尾一样，左边的两条带，右边的那条还是可以的，只不过是两次纯化的样品，感觉条件啥都一样啊，为什么会这样，又遇到过类似的情况的吗

SDS-PAGE
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1楼 2012-04-21 12:02:46
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biomater

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
所谓的纯化就是超滤离心？那不妨多做几次，充分打散后，在离心。。。。
左边很明显没有除掉杂蛋白。

条带有些太靠下了，试试胶的浓度+2%。。。。
多次纯化浓度会下降，你上样的时候，用5x的loadingbuffer，同时增大上样量。右边的感觉也不是很清晰。
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7楼2012-04-23 23:42:14
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 谢谢你一直帮助我，我再调整一下浓度试一试 2012-04-22 15:01:12
SDS-PAGE电泳拖尾可能是杂蛋白或者样品浓度较大。解决方法：先对于样品进行离心或超滤，加上蒸馏水稀释，再上样电泳；如果效果还是不佳，建议做分子筛层析纯化后对于样品进行离心或超滤，加上蒸馏水稀释，再上样电泳。膜蛋白纯化可采用疏水层析。
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2楼2012-04-21 22:13:27
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BioChemCom

银虫 (小有名气)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 我也不知道 可能是溴酚蓝吧 2012-04-22 15:00:25
说实在话的，没有看懂你的图。左边两个泳道都有两条带，右边那条泳道只有一条带。这是怎么回事呢？
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3楼2012-04-22 11:04:11
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 可能是浓缩的程度不一样，导致两次样品浓度不一样，下次我离心试一试吧 2012-04-22 14:59:44
左边条带拖尾应该是溶质不纯的原因啦 离心一下就好 而且右边条带似乎浓度不高的样子 有降解吗？
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4楼2012-04-22 13:25:05
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